【摘 要】
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目的 构建驼源天然纳米抗体噬菌体展示文库并进行验证,用于筛选针对不同抗原的纳米抗体,并以CD19为抗原筛选靶向纳米抗体,进行表达并验证.方法 对提取的双峰驼脾脏总RNA进行
【机 构】
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宁夏医科大学临床医学院检验学系,宁夏银川750004
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目的 构建驼源天然纳米抗体噬菌体展示文库并进行验证,用于筛选针对不同抗原的纳米抗体,并以CD19为抗原筛选靶向纳米抗体,进行表达并验证.方法 对提取的双峰驼脾脏总RNA进行反转录并通过巢式PCR获得其重链可变区基因片段,构建至pCANTAB5e噬菌粒载体中,电转化至TG1大肠杆菌构建纳米抗体噬菌体展示库,以辅助噬菌体KM13进行救援后,分析库容及多样性.以CD19为抗原,采用生物素化抗原与链霉亲和素磁珠相结合的方法进行纳米抗体的淘筛,对淘筛后的单克隆进行ELISA鉴定、测序、分析、表达和验证.结果 构建的纳米抗体噬菌体展示库有较好的多样性,片段插入率接近100％,随机挑取的20个克隆中其氨基酸同源性为65.85％,经辅助噬菌体救援后展示库滴度为9.0× 1013集落形成单位(CFU)/mL.对以CD19为抗原淘筛后获得的阳性克隆进行测序分析,并对纳米抗体进行表达与验证,结果显示具有与CD19结合的能力.结论 成功构建滴度高、多样性好的驼源天然纳米抗体噬菌体展示库,以CD19为抗原进行淘筛获得三条抗CD19纳米抗体序列,为研究以CD19为靶标的诊断试剂盒以及抗体药物提供技术支持,为制备靶向CD19的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞提供基础.
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