比较瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFb)与正常皮肤成纤维细胞(NFb)在常氧和低氧培养状态下的线粒体功能和能量代谢状态,以探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞线粒体功能在瘢痕疙瘩发病中的作用。
方法采用组织块贴壁法原代培养KFb和NFb。常氧和低氧(2% O2)条件下培养KFb与NFb,CCK-8检测细胞增殖情况,分光光度法测定细胞氧消耗率和乳酸生成,化学发光仪检测细胞ATP生成情况,流式细胞仪检测细胞线粒体数量和活性氧含量,透射电镜观察细胞线粒体超微结构,RT-PCR检测线粒体融合/分裂相关基因MFN1、MFN2、FIS1的表达。
结果常氧培养1~5 d,KFb与NFb的细胞数之比分别为0.98、1.04、1.18、1.08和1.31,2% O2条件下培养1~5 d,KFb与NFb细胞数之比分别为1.15、1.13、1.13、1.30和1.31。常氧下KFb的细胞耗氧率和ATP含量分别比NFb低12.95%和45.70%(P<0.05),低氧培养48 h后KFb耗氧率和ATP含量分别增加25.92%和56.24%(P<0.05),而NFb耗氧率和ATP变化不明显。常氧条件下KFb乳酸生成较NFb少,2%低氧条件下培养1~5d的KFb乳酸生成量较常氧下的KFb分别增高19.87%、34.51%、92.64%、75.31%、125.38%,低氧培养1~5d的NFb乳酸生成与常氧下相比并无明显变化。常氧条件下KFb与NFb中活性氧含量相差不大;2%低氧条件下KFb和NFb中活性氧均随时间逐渐增加,NFb在低氧6 h后活性氧升高到稳定水平(6 h、12 h、24 h分别增加86.30%、79.04、94.83%),KFb在低氧6 h后活性氧仍持续升高(6 h、12 h、24 h分别增加42.68%、115.25%、209.11%)。KFb中线粒体数量比NFb多15.33%(P<0.05),电镜下观察发现KFb线粒体明显增大,嵴融合消失,RT-PCR检测发现KFb中MFN1、MFN2、FIS1表达比NFb分别升高33.27%、113.39%和20.34%(P<0.05)。
结论KFb可能存在线粒体功能障碍,引起细胞代谢模式改变,使得KFb能适应低氧下细胞的持续增殖。