dsODNs 靶向封闭肺泡巨噬细胞中 NF -κB炎症信号通路的实验研究

来源 :中国急救医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lxhldc
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目的:在确定脂质体转染双链寡聚脱氧核苷酸( dsODNs )最佳转染浓度及时间的基础上,评估脂质体转染的双链寡聚脱氧核苷酸( dsODNs/Lipofectamin2000)竞争性抑制对肺泡巨噬细胞中核因子κB( NF-κB)/DNA结合活性的影响,验证dsODNs-decoy策略靶向封闭肺泡巨噬细胞中NF-κB信号通路的可行性。方法支气管肺泡灌洗分离提取家兔肺泡巨噬细胞( AMs)后体外培养,以Lipofectamine2000为载体转染dsODNs后对巨噬细胞进行干预,测定巨噬细胞中dsODNs/Lipofectamine2000的转染活性、转染效率及转染后对AMs的毒性;检测dsODNs/Lipofectamine2000转染对炎症因子( IL -1α、IL -6、TNF -α等) mRNA 的表达;观察 dsODNs/Lipofectamine2000转染后NF -κB p65亚基的核移位情况。结果转染肺泡巨噬细胞dsODNs/Lipofectamine2000的最适比例为1∶5,最佳时间为6 h,此时细胞毒性适中,转染效率、荧光强度及细胞状态最佳;与LPS组比较,dsODNs/Lipofectamine2000转染组各种炎症介质mRNA的表达均明显抑制(P<0.01);细胞核中NF-κB p65亚基的表达明显少于细胞浆中。结论 dsODNs/Lipofecetamine2000能在体外有效转染AMs并成功抑制AMs中NF-κB信号通路相关炎症靶基因的转录表达,证实了dsODNs-decoy策略影响炎症效应细胞的可行性。
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