【摘 要】
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目的 观察经促红细胞生成素(EPO)干预后,体外模拟急性肾损伤(AKI)微环境下培养骨髓间充质干细胞(BM-MSC)的分化及分泌功能变化.方法 Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离C
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目的 观察经促红细胞生成素(EPO)干预后,体外模拟急性肾损伤(AKI)微环境下培养骨髓间充质干细胞(BM-MSC)的分化及分泌功能变化.方法 Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离C57BL/6小鼠BM-MSC(mBM-MSC).构建缺血再灌注(I/R)诱导AKI小鼠模型,制作健康小鼠及I/R小鼠肾脏匀浆上清.取扩增3代的mBM-MSC分组培养:A组:含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液培养；B组:健康小鼠肾脏匀浆上清干预；C组:I/R小鼠肾脏匀浆上清干预,体外模拟AKI微环境；D组:I/R小鼠肾脏匀浆上清+不同浓度EPO(1、5、10、50 U/ml)干预；培养1、3、5、7d.倒置显微镜观察细胞形态,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞仪检测细胞角蛋白18(CK18),酶联免疫吸附试验( ELISA)检测培养上清液中骨形态发生蛋白7(BMP-7)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平.结果 分离获得的P3-mBM-MSC高表达CD29和CD44,低表达CD34和CD45.与A、B组长梭形细胞相比,C组部分细胞出现椭圆形、短梭形、圆形外观,EPO干预可使细胞呈现鹅卵石样外观,且C、D组细胞的胞质内细胞器丰富,并可见微绒毛及桥粒.A、B组mBM-MSC内仅有极微量CK18表达,C、D组CK18阳性表达率显著高于A、B组(均P＜0.01),50 U/mlEPO干预5、7d后CK18表达量显著高于同时间点C组(5 d:35.22 ±4.04比8.72±0.38,7 d:42.00±5.39比13.20±1.14,均P＜0.01).A、B组上清液中均见有BMP-7、HGF、VEGF表达,两组间差异无统计学意义,C组表达量均显著低于A、B组(P ＜0.05或P＜0.01).结论 EPO干预可增强mBM-MSC的分化功能,并逆转其低分泌效应.
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