【摘 要】
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目的: 制备有较高生物学活性的分泌型人α防御素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法: 将真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO-HNP1,3与含有dhfr基因的质粒pDCH1P11共转染
【机 构】
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第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心,第四军医大学唐都医院检验科
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目的: 制备有较高生物学活性的分泌型人α防御素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法: 将真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO-HNP1,3与含有dhfr基因的质粒pDCH1P11共转染入CHO-dhfr-,ELISA检测到培养上清中重组蛋白的表达,对阳性表达的细胞进行G418筛选,对其中9个表达量较高的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压扩增, ELISA法、RT-PCR法及间接免疫荧光(IFA)分析蛋白表达情况,并同步测定其体外抗菌活性.结果: α防御素1的表达量是18.85～47.46 mg/L*48 h*106个细胞; α防御素3的表达量是16.89～35.57 mg/L*48h*106 个细胞.用RT-PCR从稳定表达的细胞株中扩增出全长约303 bp的片段;IFA 显示稳定转染的细胞胞质核周质中有强的绿色荧光;K-B纸片琼脂扩散法显示α防御素1,3在大肠埃希菌MH平板上形成了明显的抑菌圈.结论: 成功高效地表达了分泌型的α防御素1,3,并具有良好的生物学活性,为进一步探讨α防御素1,3对HIV-1的抑制作用提供了物质基础.
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