慢病毒载体PLKO.1-shHIF-2α的构建及鉴定

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目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的干涉缺氧诱导因子(HIF)-2α表达的慢病毒载体,并对所得产物进行鉴定。方法体外合成的单链HIF-2α干涉片段经过退火后形成的双链片段和以质粒 PCDH为模板扩增出的EF1-EGFP 均与PLKO.1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒PLKO.1-shHIF-2α,后者与pMD2G,pSAX2共转染293 FT细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒。用其感染786-0细胞,检测细胞中GFP表达情况。结果成功扩增出干涉HIF-2α片段和EF1-EGFP片段,酶切鉴定及
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