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【目的】构建PK-15细胞酵母双杂交三框eDNA文库，为深入研究猪伪狂犬病病毒（PRV）与宿主细胞间的相互作用机制打下基础。【方法】提取PK-15细胞总RNA，采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA（dscDNA），并对其进行均一化和SfiI酶切处理。，处理后的dscDNA分别连接3种阅读框pGADT7-SfiI载体，将连接产物转化至大肠杆菌BH5α构建三框cDNA初级文库，取三框cDNA初级文库进行混合扩增，通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率，最后收集文库细菌提取文库质粒。【结果】