【摘 要】
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该文旨在从Ras相关的C3肉毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1）/LIM激酶1（LIM kinase 1,LIMK1）通路探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial
【机 构】
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蚌埠医学院心脑血管疾病基础与临床重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81673791）； 蚌埠医学院研究生创新计划项目（Byycx20002）；
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该文旨在从Ras相关的C3肉毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1）/LIM激酶1（LIM kinase 1,LIMK1）通路探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）骨架重构的保护作用。采用Ⅷ因子免疫荧光鉴定原代内皮细胞;分别用0、50、100、200、300 ng/mL的LPS处理对数生长期的原代HUVECs;采用低、中、高3个剂量的TMP对HUVECs预处理12 h;利用F-actin免疫荧光染色观察细胞骨架变化;通过跨膜电阻值（transepithelial electrical resistance,TEER）和FITC-葡聚糖Transwell实验检测人脐静脉内皮细胞通透性;Western blot检测Rac1、LIMK1的表达以及相应磷酸化水平;免疫荧光观察磷酸化LIMK1蛋白的细胞定位和表达水平变化;实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）检测Rac1和LIMK1的mRNA水平。结果显示,Ⅷ因子免疫荧光鉴定原代提取的内皮细胞符合要求;HUVECs经LPS诱导后,镜下形态由卵圆形向长梭形改变,纤维状肌动蛋白（filament actin,F-actin）增多增粗,TEER降低及单层内皮细胞通透性增加;Rac1、LIMK1的表达及磷酸化水平呈LPS梯度依赖性升高（P＜0.05）;低浓度的TMP降低LPS诱导的F-actin增多增粗作用,并降低Rac1、LIMK1的表达及其磷酸化水平（P＜0.05）;高浓度的TMP可以抑制Rac1激活（P＜0.05）,但对LPS诱导的HUVECs细胞骨架重构和通透性增加没有保护作用（P＞0.05）。该研究结果表明,TMP通过Rac1/LIMK1通路保护LPS诱导的HUVECs骨架重构,抑制由LPS诱导的HUVECs通透性增大,对临床运用TMP改善由内皮细胞高通透性引起的急性肺损伤提供理论依据。
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