【摘 要】
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通过化学萃取加震荡法制备脑去细胞外基质,并对其进行形态学分析和成分鉴定。健康成年SD大鼠20只,分成正常对照组和去细胞组。去细胞组大鼠经心脏灌流后取脑,通过化学萃取加
【机 构】
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衢州市人民医院药剂科,温州医科大学药学院
【基金项目】
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国家自然科学基金(8157060643)
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通过化学萃取加震荡法制备脑去细胞外基质,并对其进行形态学分析和成分鉴定。健康成年SD大鼠20只,分成正常对照组和去细胞组。去细胞组大鼠经心脏灌流后取脑,通过化学萃取加震荡法,依次用3%的Trition X-100、1%的SDS、4%的脱氧胆酸钠震荡萃取,无菌蒸馏水漂洗制备脑去细胞外基质(d BECM)。通过扫描电镜观察dBECM微观形态,用HE染色和荧光DAPI染色分析其去细胞化的效果,进一步通过Masson染色和免疫荧光染色进行成分的鉴定。通过HE染色及荧光DAPI染色可以发现,该方法去细胞化程度完全(去细胞程度大于99%),仅保留大量细胞外基质,未见明显的细胞及细胞核成分残留;Masson染色和免疫荧光染色发现,dBECM保留弹性蛋白(4.0%±1.1%)、层粘连蛋白(19.0%±1.6%)、纤维连接蛋白(9.0%±2.1%)、Ⅳ型胶原蛋白(16.0%±1.9%)等成分。化学萃取加震荡法可有效地去除大鼠脑组织内的细胞成分,制备得到的脑去细胞外基质较好地维持宏观和微观的三维结构,保留细胞外基质支架的蛋白成分,是一种简便且理想的脑去细胞外基质制备技术。
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