【摘 要】
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目的 制备自身失活型慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞(Treg细胞),检测其表型变化,并观察其增殖能力及免疫抑制能力.方法 构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序
【机 构】
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徐州医学院附属医院血液科,221002
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目的 制备自身失活型慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞(Treg细胞),检测其表型变化,并观察其增殖能力及免疫抑制能力.方法 构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子自身失活型慢病毒载体.采用脂质体转染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4+CD25-T细胞,流式细胞术(FCM)检测基因转染效率及细胞Foxp3、CD25、GITR、CTLA-4的表达,CCK-8法、ELISA法检测其增殖、免疫抑制能力及细胞因子分泌的变化.结果 成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES-GFP、pXZ208-Foxp3-IRES-GFP,包装的重组慢病毒滴度达106IU/ml.以pXZ208-IRES-GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4+CD25-T细胞,实验组细胞Foxp3、CD25、CTLA-4、GITR表达升高.在抗CD3ε单抗、抗原呈递细胞存在条件下,实验组细胞增殖能力及IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的分泌均低于阴性对照组(P
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