【摘 要】
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目的 构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗,探讨其诱导机体免疫应答的能力.方法 将HSV-2野生株经PCR鉴定后,利用PCR技术从其
【机 构】
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复旦大学附属华山医院皮肤科,复旦大学生命科学学院病毒与分子免疫学研究室
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目的 构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗,探讨其诱导机体免疫应答的能力.方法 将HSV-2野生株经PCR鉴定后,利用PCR技术从其基因组扩增出HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282和gD1-77等6个基因片段.采用多基冈片段一步酶切连接法获得构建的6个片段的复合DNA疫苗(HV)融合基冈片段,经pGEMT载体克隆后,定向插入真核表达质粒pcDNA3.1载体中,构建重组真核表达质粒HV-pcDNA3.1,并对其进行酶切分析及测序鉴定.10只C57/BL6小鼠均分为脂质体包裹pcDNA3.1空载体质粒对照组和脂质体包裹HV-pcDNA3.1质粒免疫组.ELISA检测小鼠血清HSV-2特异性IgG、IL-2和IFN-γ,乳酸脱氢酶法检测CTL功能.数据行t检验.结果 酶切重组质粒HV-pcDNA3.1,电泳可见两条带,分别为融合基因HV(1.3 kb)和线性质粒pcDNA3.1(5.4 kb).测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与基因库HSV-2相关序列同源性达99.9%.与pcDNA3.1空载体质粒组相比,HV-pcDNA3.1免疫组小鼠血清中HSV-2特异性IgG(0.29±0.14比0.11±0.04,P＜0.05)、IL-2(1 246.8±157.0比685.2±104.2,P＜0.05)和IFN-γ(1 340.3±108.5比547.7±189.3,P＜0.05)表达明显增加,CTL活性增强(31.82±10.12比8.30±2.91,P＜0.05).结论 成功构建了HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗,能有效引起小鼠机体特异性体液免疫和细胞免疫应答.
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