提高RAPD稳定性的几点经验与探讨

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随机扩增多态DNA(RAPD)技术自1990年由Williams和Welsh建立以来,因其特异、快速、操作简便、敏感的优点,在微生物分型和检测[1,2]、生物亲缘关系的鉴定[3]以及遗传育种[4]中已得到广泛应用,其原理与常规PCR基本相同,但RAPD采取的引物多为一条随机的十聚寡核苷酸序列,这种引物不属于已知遗传位点,它能通过PCR介导所有与其互补的基因区段进行扩增,产生一系列大小不同的片段,并通过琼脂糖凝胶电泳而呈现不同的DNA指纹图。由于RAPD不需要知道模板的序列,且引物序列无种属特异性,在对遗传背景所知甚少物种的遗传分析方面具特殊优势。但其稳定性差是长期困惑人们的问题,大大限制了它的应用,在常规PCR和dd-PCR中也存在着同样问题,我们在实验过程中积累了一些这一方面的经验,整理如下,供同行学者参考。
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