【摘 要】
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目的 在悬浮CHO-S细胞中稳定表达重组人骨形态发生蛋白7(recombinant human bone morphgenetic protein 7,rhBMP7)成熟蛋白.方法 应用RT-PCR技术从BALB/c乳鼠股骨组织扩增mbm
【机 构】
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长春生物制品研究所,吉林长春,130012珠海霍普金斯医药研究院有限公司,广东珠海,519031;长春生物制品研究所,吉林长春130012;珠海希望基因医药研究院有限公司,广东珠海519031;
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目的 在悬浮CHO-S细胞中稳定表达重组人骨形态发生蛋白7(recombinant human bone morphgenetic protein 7,rhBMP7)成熟蛋白.方法 应用RT-PCR技术从BALB/c乳鼠股骨组织扩增mbmp7基因,克隆至质粒pMD18-T,通过定点突变3个氨基酸编码序列(G266S、S287N、D359E),得到重组克隆质粒pMD18-mbmp7m3;将mbmp7m3克隆至表达载体pCH01.0,构建重组表达质粒pCHO-mbmp7m3,转染CHO-S细胞,利用嘌呤霉素和甲氨蝶呤进行两轮加压筛选,有限稀释法筛选单克隆细胞,ELISA法检测rhBMP7成熟蛋白的表达.结果 从乳鼠股骨组织扩增的cDNA经测序与GenBank中登录的序列完全一致,点突变后测序与设计完全一致.获得了稳定表达rhBMP7成熟蛋白的单克隆细胞株,最高表达量为202 ng/ mL.结论 成功利用改造的mbmp7基因在CHO-S细胞中表达了rhBMP7成熟蛋白,为后续该制品工艺开发及产业化奠定了基础.
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