【摘 要】
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为研究山羊痘病毒的059蛋白,本研究用PCR技术扩增山羊痘病毒THX株059基因,并构建了融合表达His标签的原核表达载体,测序鉴定并分析了059基因的核苷酸序列特征和推测的氨基酸
【机 构】
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塔里木大学动物科学学院; 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室; 塔里木大学生命科学学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31360616;31760741);塔里木畜牧科技兵团重点实验室开放课题项目(HS201307)
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为研究山羊痘病毒的059蛋白,本研究用PCR技术扩增山羊痘病毒THX株059基因,并构建了融合表达His标签的原核表达载体,测序鉴定并分析了059基因的核苷酸序列特征和推测的氨基酸序列结构特征,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot鉴定其蛋白表达情况。结果成功扩增并构建了山羊痘病毒059基因的原核表达载体PET-42b-059,THX株059基因全长为765 bp,与参考株的相似性高达99. 34%,与山羊痘病毒在亲缘关系上较近,而与疙瘩皮肤病病毒与绵羊痘病毒的亲缘关系较远。059蛋白会长255aa,由多个α螺旋和β片层交错构成,分子量大小为29 KDa,SDS-PAGE结果显示其以包涵体的形式表达,大小与理论相符,Western Blot结果证明059蛋白与His标签进行了融合表达。结果表明059蛋白可以较好原核表达,为进一步研究该蛋白的其他生物学特性奠定了基础。
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