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目的
建立一种体外连续传代培养小鼠膀胱平滑肌细胞(BSMCs)的方法并探讨纤维连接蛋白1(FN1)沉默对小鼠BSMCs周期分布和凋亡的影响。
方法采取多酶联合消化法进行原代培养，分离获取小鼠原代BSMCs，通过形态学观察和免疫荧光法对细胞进行鉴定；使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法对其增殖特性进行检测。使用针对FN1的小干扰RNA(FN1-siRNA)转染BSMCs，将体外培养的BSMCs分为空白组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照NC-siRNA)和干扰组(转染FN1-siRNA)，流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡率。3组间以上指标的比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q检验。
结果从小鼠中获得的BSMCs纯度可达97%，细胞呈典型的"峰-谷"样结构。免疫荧光鉴定可见胞质内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性表达。FN1-siRNA转染后[G0/G1(68.20±3.82)%、S(17.78±1.48)%、G2/M(14.04±2.04)%]与转染前[G0/G1(49.59±2.38)%、S(28.75±1.94)%、G2/M (21.71±1.93)%]比较，增殖水平降低；与转染前[(3.12±0.65)%]比较，转染后[(17.36±2.62)%]凋亡率升高(F＝89.346，P<0.05)。
结论体外培养获得的小鼠BSMCs具有较好增殖能力。靶向沉默FN1的表达可诱导BSMCs周期阻滞和凋亡。