为建立H5N1亚型禽流感病毒感染海兰白鸡模型,本研究选取1株鹅源H5N1高致病性禽流感病毒A/goose/guangdong/1/96(H5N1)(简称GD1/96),测定其对4周龄海兰白鸡的半数致死量。感染模型试验中,将30只4周龄海兰白鸡随机分成3组,每组10只,5只直接感染,5只同居,试验组设置一个重复,将病毒液稀释至104.5EID50,滴鼻、点眼各0.1mL,对照组接种PBS,感染后24h放入同居鸡;感染后连续观察14d,记录死亡时间,每天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子;感染组和同居组第3、5天各剖解3只鸡,采集气管、肺脏、脑、脾脏、肾脏和十二指肠,进行病毒分离;qRT-PCR法分析感染组和同居组第3、5天鸡肺组织中IFN-α和TNF-α的相对表达量。结果显示,GD1/96株的鸡胚半数感染量(EID50)为10-8.167/0.1mL,对4周龄海兰白鸡的半数致死量为104.5 EID50。感染模型试验结果显示,以104.5 EID50的攻毒剂量感染海兰白鸡,感染组鸡在感染后8d全部死亡;在感染和同居3d后,各组鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子均可检测到病毒;感染和同居后第3、5天,各组鸡的6种组织中均可分离到高滴度的病毒;IFN-α和TNF-α在感染组和同居组的鸡肺脏组织中的表达量均显著增加(P<0.05)。本试验建立了海兰白鸡的H5N1亚型禽流感病毒感染模型,为H5N1亚型禽流感病毒的致病机理及表达抗流感基因转基因鸡的研究奠定了基础。