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摘要：目的：肺炎链球菌感染是导致细菌性疾病和死亡的主要原因。然而，肺炎链球菌却对青霉素、红霉素以及三代头孢菌素等多种抗生素耐药，不利于临床治疗。本文旨在探讨肺炎链球菌的耐药机制，进行耐药性检测和药敏试验。方法：从2009-2011年在医院进行治疗的呼吸道感染病人的痰液中分离出肺炎链球菌30株，对其药敏结果进行检测分析。结果：肺炎链球菌的耐药性存在地区差异。结论：根据药敏结果在本地区选取合理有效的抗生素对患者进行治疗，或者对易感人群进行肺炎链球菌疫苗接种。
关键词：肺炎链球菌 药敏试敏 检验结果【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1008-1879（2012）12-0205-01
肺炎链球菌感染是导致细菌性疾病和死亡的主要原因，它寄居在人体上呼吸道，是一种条件致病菌，人体抵抗力下降时，肺炎链球菌即引起支气管炎或大叶肺炎，还可能导致中耳炎、脑膜炎等多种疾病。20世纪60年代以前，医学界普遍认为肺炎链球菌对青霉素高度敏感，因此，将青霉素作为治疗的首选药物。自1967年首次发现耐青霉素肺炎链球菌后，青霉素对其的治疗效果明显减弱。近年来，又陆续发现肺炎链球菌对红霉素、三代头孢菌素的耐药性，严重影响了临床治疗，故对分离出的肺炎链球菌进行药敏性分析，为临床治疗提供更多的参考。
1 材料和方法
1.1 菌株来源。2009-2011年在医院接受治疗的呼吸道感染病人的痰液中分离出的肺炎链球菌30株。
1.2 分离与鉴定。根据菌落形态、革兰氏染色，结合胆汁溶液试验、Optochin敏感试验、ATB自动化细菌鉴定仪等鉴定，检出的肺炎链球菌为该标本单一菌种或主要菌种。
1.3 药敏试验。在NCCLS的动员下，相关实验室开发了可靠的肺炎链球菌专用的药敏试验方法。主要有纸片扩散法、微量稀释法和商品试剂盒法。
1.3.1 纸片扩散法[1]。纸片扩散法使用羊血平板，0.5麦氏浊度菌液接种平板。纸片法简单易行，将平板上放在35摄氏度，5%CO2中培养20—24h。但纸片扩散法对一些青霉素类和头孢菌素类药物的准确性不够理想，易出现重要误差和次要误差。NCCLS对解释抑菌环和质控标准都有特别规定[2]。头孢噻肟、头孢曲松纸片药敏试验会产生15%的次要误差。
1.3.2 微量稀释法[1]。微量稀释法采用经离子校正的M—H肉汤加入2%-5%溶血马血的培养基，将抗生素稀释于培养基中，分装微量板。用羊血平板上的菌落制备菌液，加入微量板，在35摄氏度、普通环境下培养20—24h，然后人工判定结果，MIC的解释可以参考NCCLS的最新文件中的标准。
1.3.3 商品试剂盒法[1]。采用经FDA认可的商品药敏试剂盒，参照微量稀释法设计，微量板上有14对含有一种或多种浓度的测试杯。挑取菌落制成懸浮液，接种到测试杯中，在35摄氏度、普通环境下培养20—24h，然后人工判定结果。或用ATB鉴定仪直接测定MIC，MIC的解释可以参考NCCLS的最新文件中的标准。
1.3.4 药敏试验的质量控制。每周以肺炎链球菌标准菌株ATCC49619对10种抗生素纸片进行药敏试验。所有质控结果均符合NCCLS最新颁布的药敏质控范围。
2 结果
作为试验标本的肺炎链球菌对青霉素、万古霉素、左氧氟沙星和阿莫西林的敏感率为100%，对复方新诺明、红霉素和林可霉素的耐药率较高。所以，在该地区内治疗肺炎链球菌感染仍然以青霉素为首要选择，而复方新诺明、红霉素和林可霉素已经不能适用于该地区感染的治疗了。肺炎链球菌的耐药性存在地区差异，因此，应该根据所在地细菌的药敏试验结果，选择合理有效的抗生素进行治疗。
3 讨论
自1967年发现第一株耐青霉素的肺炎链球菌后，耐青霉素的肺炎链球菌在全球范围内明显增多。随后，医学界开始使用三代头孢菌素治疗肺炎链球菌感染，但很快又出现了对三代头孢菌素产生耐药性的肺炎链球菌[3]。
肺炎链球菌细胞壁上有多种青霉素结合蛋白，当抗生素与结合蛋白结合时，细菌生长受到抑制，细菌体迅速溶解。但产生耐药性的肺炎链球菌，有一种或多种结合蛋白的结构发生了变化，对青霉素的亲和力下降，导致对青霉素产生耐药[4]。低亲和力的结合蛋白是由于基因编码变异导致的，这种变异不是突变，是由于转座子直接“跳跃”至细菌的DNA上进行复制，这种变异是具有多样性，因为可以发生在不同的位点，从而获得不同类型的低亲和力的结合蛋白。
近年来，对耐青霉素肺炎链球菌的报道日渐增多，耐药肺炎链球菌大部分是社区感染导致的，抗生素的不合理大量使用导致细菌产生耐药性，并从一个地区传播到另一个地区。这对医学工作者而言，并不是一个好消息，因为人们无法控制由转座子、质粒或转型变异导致耐药基因扩散的遗传机制，细菌的耐药性已经成为医学界必须重视的问题，临床治疗中合理有效使用抗生素是减少和预防耐药性肺炎链球菌产生的重要保证。在高度流行区域，应对易感高危人群进行积极的预防。目前，对肺炎链球菌疫苗的开发已经在进行中，尽管目前研发出的疫苗效果还不尽如人意，但随着改进研究的进一步发展，一定会研发出能有效积极预防肺炎链球菌感染的疫苗。
参考文献
[1]Nation Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susecptibility Tests-Sixth Edition； Approved Standard M2-A6，2008
[2]Methods for dilution antimicrobial susceptibility test for bacteria that grow aerobically[E].Nation Committee for Clinical Laboratory Standards，2007，M7A4
[3]张秀珍.当代细菌检验与临床[M].北京：人民卫生出版社，2009：126-127
[4]刘克强，司进，张菊英等.肺炎链球菌所致下呼吸道感染的耐药性分析[J].中国中西医结合急救杂志，2010，11（4）：242-244
关键词：肺炎链球菌 药敏试敏 检验结果【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1008-1879（2012）12-0205-01
肺炎链球菌感染是导致细菌性疾病和死亡的主要原因，它寄居在人体上呼吸道，是一种条件致病菌，人体抵抗力下降时，肺炎链球菌即引起支气管炎或大叶肺炎，还可能导致中耳炎、脑膜炎等多种疾病。20世纪60年代以前，医学界普遍认为肺炎链球菌对青霉素高度敏感，因此，将青霉素作为治疗的首选药物。自1967年首次发现耐青霉素肺炎链球菌后，青霉素对其的治疗效果明显减弱。近年来，又陆续发现肺炎链球菌对红霉素、三代头孢菌素的耐药性，严重影响了临床治疗，故对分离出的肺炎链球菌进行药敏性分析，为临床治疗提供更多的参考。
1 材料和方法
1.1 菌株来源。2009-2011年在医院接受治疗的呼吸道感染病人的痰液中分离出的肺炎链球菌30株。
1.2 分离与鉴定。根据菌落形态、革兰氏染色，结合胆汁溶液试验、Optochin敏感试验、ATB自动化细菌鉴定仪等鉴定，检出的肺炎链球菌为该标本单一菌种或主要菌种。
1.3 药敏试验。在NCCLS的动员下，相关实验室开发了可靠的肺炎链球菌专用的药敏试验方法。主要有纸片扩散法、微量稀释法和商品试剂盒法。
1.3.1 纸片扩散法[1]。纸片扩散法使用羊血平板，0.5麦氏浊度菌液接种平板。纸片法简单易行，将平板上放在35摄氏度，5%CO2中培养20—24h。但纸片扩散法对一些青霉素类和头孢菌素类药物的准确性不够理想，易出现重要误差和次要误差。NCCLS对解释抑菌环和质控标准都有特别规定[2]。头孢噻肟、头孢曲松纸片药敏试验会产生15%的次要误差。
1.3.2 微量稀释法[1]。微量稀释法采用经离子校正的M—H肉汤加入2%-5%溶血马血的培养基，将抗生素稀释于培养基中，分装微量板。用羊血平板上的菌落制备菌液，加入微量板，在35摄氏度、普通环境下培养20—24h，然后人工判定结果，MIC的解释可以参考NCCLS的最新文件中的标准。
1.3.3 商品试剂盒法[1]。采用经FDA认可的商品药敏试剂盒，参照微量稀释法设计，微量板上有14对含有一种或多种浓度的测试杯。挑取菌落制成懸浮液，接种到测试杯中，在35摄氏度、普通环境下培养20—24h，然后人工判定结果。或用ATB鉴定仪直接测定MIC，MIC的解释可以参考NCCLS的最新文件中的标准。
1.3.4 药敏试验的质量控制。每周以肺炎链球菌标准菌株ATCC49619对10种抗生素纸片进行药敏试验。所有质控结果均符合NCCLS最新颁布的药敏质控范围。
2 结果
作为试验标本的肺炎链球菌对青霉素、万古霉素、左氧氟沙星和阿莫西林的敏感率为100%，对复方新诺明、红霉素和林可霉素的耐药率较高。所以，在该地区内治疗肺炎链球菌感染仍然以青霉素为首要选择，而复方新诺明、红霉素和林可霉素已经不能适用于该地区感染的治疗了。肺炎链球菌的耐药性存在地区差异，因此，应该根据所在地细菌的药敏试验结果，选择合理有效的抗生素进行治疗。
3 讨论
自1967年发现第一株耐青霉素的肺炎链球菌后，耐青霉素的肺炎链球菌在全球范围内明显增多。随后，医学界开始使用三代头孢菌素治疗肺炎链球菌感染，但很快又出现了对三代头孢菌素产生耐药性的肺炎链球菌[3]。
肺炎链球菌细胞壁上有多种青霉素结合蛋白，当抗生素与结合蛋白结合时，细菌生长受到抑制，细菌体迅速溶解。但产生耐药性的肺炎链球菌，有一种或多种结合蛋白的结构发生了变化，对青霉素的亲和力下降，导致对青霉素产生耐药[4]。低亲和力的结合蛋白是由于基因编码变异导致的，这种变异不是突变，是由于转座子直接“跳跃”至细菌的DNA上进行复制，这种变异是具有多样性，因为可以发生在不同的位点，从而获得不同类型的低亲和力的结合蛋白。
近年来，对耐青霉素肺炎链球菌的报道日渐增多，耐药肺炎链球菌大部分是社区感染导致的，抗生素的不合理大量使用导致细菌产生耐药性，并从一个地区传播到另一个地区。这对医学工作者而言，并不是一个好消息，因为人们无法控制由转座子、质粒或转型变异导致耐药基因扩散的遗传机制，细菌的耐药性已经成为医学界必须重视的问题，临床治疗中合理有效使用抗生素是减少和预防耐药性肺炎链球菌产生的重要保证。在高度流行区域，应对易感高危人群进行积极的预防。目前，对肺炎链球菌疫苗的开发已经在进行中，尽管目前研发出的疫苗效果还不尽如人意，但随着改进研究的进一步发展，一定会研发出能有效积极预防肺炎链球菌感染的疫苗。
参考文献
[1]Nation Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susecptibility Tests-Sixth Edition； Approved Standard M2-A6，2008
[2]Methods for dilution antimicrobial susceptibility test for bacteria that grow aerobically[E].Nation Committee for Clinical Laboratory Standards，2007，M7A4
[3]张秀珍.当代细菌检验与临床[M].北京：人民卫生出版社，2009：126-127
[4]刘克强，司进，张菊英等.肺炎链球菌所致下呼吸道感染的耐药性分析[J].中国中西医结合急救杂志，2010，11（4）：242-244