【摘 要】
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目的 将shRNA 稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F 中,使得氯离子通道蛋白1(CLIC1)基因表达抑制,观察肿瘤细胞的增殖、细胞周期、凋亡情况以及迁移能力的变化.方法 设计并合成理
【机 构】
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大连医科大学附属第二医院消化内科,大连医科大学病理学教研室,大连医科大学附属第二医院超声科
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目的 将shRNA 稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F 中,使得氯离子通道蛋白1(CLIC1)基因表达抑制,观察肿瘤细胞的增殖、细胞周期、凋亡情况以及迁移能力的变化.方法 设计并合成理论上最佳的shRNA 序列,进而将其插入pGPU6 /GFP /Neo 质粒中,经测序和双酶切验证载体构建成功后以梭华-Sofast 将DNA 质粒稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F 中,经Real-time RT-PCR 验证CLIC1 mRNA 表达下调后,应用CCK-8 试剂盒和流式细胞仪检测干扰前后的Hca-F 细胞,对比观察细胞的增殖、细胞周期和凋亡情况的变化,应用Transwell 小室检验其迁移能力的变化.结果 pGPU6 /GFP /Neo-shRNA 对CLIC1 mRNA 抑制效果明显,抑制率达57%.经该表达质粒的干扰后,Hca-F 细胞的增殖能力明显增强,停留于G2 /M 期的细胞明显增多,凋亡细胞显著减少,Transwell 小室中穿膜细胞数量明显减少.结论 CLIC1 基因具有抑制小鼠肝癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用,并且参与细胞周期中G2 /M 期的调节,同时能够促进肿瘤细胞的迁移.
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