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摘要：目的：观察洗液一号抑菌、抗炎、止痒的药理作用及安全性。方法：液体试管抑茵、小鼠耳廓二甲苯致炎、大鼠角又菜胶足跖肿胀、磷酸组织胺致瘁、皮肤急性毒性、长期毒性、过敏、皮肤及粘膜刺激等实验。观察洗液一号的最小抑茵浓度、止痒、抗炎的药理作用厦皮肤粘膜毒性。结果：洗液一号对多种常见阴道炎致病茵具抑制作用，能抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度角叉莱胶所致的大鼠足跖肿胀，能明显提高豚鼠致瘁阈，未发现皮肤粘膜毒性。结论：洗液一号具有抑茵、抗炎、止痒作用且安全。
关键词：洗液一号；阴道炎；抑菌；抗炎；止痒；皮肤毒性
中图分类号：R285.5
文献标识码：A
文章编号：1007—2349(2007)06—0038—03
洗液一号是攀枝花市中心医院用于临床多年治疗妇女阴道炎的院内制剂。为了探求洗液一号的主要药理作用及客观评价其安全性，对洗液一号进行了体外抑菌、抗炎、止痒等药效学及皮肤、粘膜毒性的实验研究，现报道如下。
1材料
1.1动物ICR封闭群小鼠，体重(21±2)g，动物级别；清洁级，合格证号：云卫动管9806号。SD大鼠，体重(190±20)g，动物级别：清洁级，合格证号：云卫动管1305号。家兔，体重1.9～2.1kg，动物级别：普通级，合格证号：云卫动管0001208。豚鼠，体重250～300g，动物级别：普通级。均由昆明医学院重点实验室及动物科提供。
1.2药物及试剂洗液一号，浓度67％，攀枝花市中心医院提供，批号：20010411。临床用量用法：150ml／次，温水稀释至500～1000mI(含原生药8g／m1)，每日3次，外洗。洁尔阴，四川省成都思威公司制药厂，批号：010703；二甲苯，汕头市达濠精细化学品公司，批号：20000802。
1.3仪器电子分析天平，型号：BOSCH—SAE200，德国；足跖容积测量仪(自制)。
2方法
2.1最低抑菌浓度(MIC)测定以供试品无菌取药lml(洁尔阴原浓度，洗液一号67％浓度)，用无菌肉汤lml作倍比稀释，采用液体试管抑菌法(检测管8支，药物对照管1支，细菌对照管1支)，加入菌量0.1ml(3X106／m1)，培养18小时，然后将以上培养物分别定量转种至琼脂平板中培养18小时，观察记录实验结果。
2.2洗液一号对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 参照文献，将50只小鼠随机分为5组，每组10只。各组分别为：对照组(蒸馏水)；洁尔阴组(30％)；洗液一号高、中、低剂量组(67％、34％、17％，)。实验当日各组小鼠右耳前后两面涂药一次(O.1m1)，对照组涂以等量蒸馏水。1h后各给药组以蒸馏水洗去药液，用于棉球擦净。采用二甲苯(25μl／每耳)致小鼠耳廓肿胀法，观察记录各组小鼠左右耳片重量，计算肿胀度(即左右耳片重量之差值)，并求出抑肿率。
2.3洗液一号对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响参照文献将50只大鼠随机分为5组，每组10只。分组同方法
2.2。涂药前以改良容积法测定各组大鼠右后足(踝关节以下)体积，然后各组大鼠右后足跖部涂药0.2mI／只，对照组涂以等量蒸馏水，1h后给各组大鼠右后足跖皮下注射角叉菜胶(0.05ml／只)致炎，同时再涂药一次(对照组仍涂以等量蒸馏水)，分别于致炎后1、2、3、4、5h用改良容积法测量各组大鼠的右后足体积。计算肿胀度(即致炎前后足跖体积的差值)，并求出抑肿率。
2.4洗液一号对磷酸组织胺致豚鼠搔痒作用的影响参照文献将豚鼠随机分为4组，每组8只。分组同方法2.2。于试验前一日将各组豚鼠右后足背剪毛，分别外涂相应药物或蒸馏水(0.1ml／100g)。试验当日用砂纸擦伤豚鼠右后足背部剪毛处，面积约2cm2，局部再次涂相应药物或蒸馏水(0.1ml／100g)。10min后，用0.1％磷酸组织胺分别滴在各组豚鼠的创面处(0.05ml／只／次)，此后每隔3min滴一次，直至出现豚鼠回头舔右后足擦伤皮肤动作为止。记录并比较各组涂抹组织胺次数及致痒阈(最后出现豚鼠回头舔右后足时所给予的磷酸组织胺累积用量)。
2.5皮肤急性毒性试验体重(20±2)g小鼠，雌雄各半。参照文献，随机分为5组，每组10只，洗液一号给小鼠一次皮下注射给药(试药剂量范围：20～160g／kg；组距：1：0.5943;给药体积：0.1m／10g)，连续观察7天内动物毒性反应及死亡情况，并用点斜法计算LD50及LD50的95％可信限。
2.6皮肤长期毒性试验体重(155±10)g大鼠，雌性。参照文献，设高、中、低3个剂量组，每组动物30只。高、中、低三个剂量浓度分别为200％、100％、20％(该浓度相当于临床推荐用药浓度的10、5、1倍)。洗液一号给雌性大鼠皮肤、粘膜(大腿内侧、阴道、会阴、肛门周围)涂药，连续涂药21天(为临床验证用药周期的3倍)。
2.7皮肤刺激性实验1.9～2.1kg家兔8只，雌雄各半。参照文献，随机分为完整和破损皮肤2组，采用同体自身对比法，用赋形剂作对照，观察67％洗液一号Iml外用对家兔完整皮肤和破损皮肤的刺激作用。
2.8粘膜刺激性实验参照文献将1.9～2.1kg雌性家兔，随机分为受试组与对照组，每组4只分别阴道注入洗液一号和灭菌生理盐水(0.2ml／只／次)，每隔1h1次，共计5次。观察其有无全身毒性反应。24h后处死家兔，肉眼和镜检观察阴道粘膜有无充血和水肿等反应。如有死亡则对主要脏器进行病理检查。
2.9主动皮肤过敏实验(ACA)，将250～300g豚鼠30只随机分为3组，受试药(67％洗液一号)组、阴性对照(清洁饮用水)组及阳性对照(2、4二硝基氯代苯)组，每组10只，雌雄兼用。进行致敏与激发试验(受试区3X 3cm2，受试物量为0.2m1)。按皮肤过敏反应评分标准对皮肤红斑、水肿进行评分。计算致敏反应发生率。按皮肤致敏性评价标准对皮肤致敏性进行评价。
2.10统计方法采用SPSS8.0统计软件对实验数据进行方差分析。
3结果
3.1最低抑菌浓度(MIC)测定洗液一号对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、真菌中的白色念珠菌和石膏样小孢子菌均有不同程度的抑菌作用。对金黄色葡萄球菌及变形杆菌抑菌作用效果尤为显著，MIC与洁尔阴接近。结果见表1。
3.3洗液一号对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响洗液一号高、中低剂量组能明显抑制角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀，与阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，结果见表3。
3.4洗液一号对磷酸组织胺致豚鼠瘙痒作用的影啊 洁尔阴组能明显提高豚鼠致痒阈，与对照组比较差异有非常显著 性意义(P<0.01)；洗液一号高、中、低剂量组有明显提高豚鼠致痒阈的作用，与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05)见表4。
3.5皮肤急性毒性试验洗液一号小鼠皮下注射给药，测得其LD50=77.45g／kg，LD50的95％可信限为63.21g／kg～94.88g／kg。相当于临床推荐成人外用量1.67g／kg的46倍。本品临床应用为皮肤、粘膜外用剂，吸收至皮下者极少，故可认为本品外用安全低毒。
3.6皮肤长期毒性试验全部动物健康存活，生长发育和行为活动未见明显异常反应。体重随时间的推移各组均相应增加。血液学、血液生化学检测的各项指标均在正常范围。心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、肾上腺、甲状腺、胸腺、子宫、卵巢和涂药部位皮肤、粘膜等重要脏器组织，肉眼观察未见异常，病理组织学检查亦未发现毒性损害。各组间脏器系数差异无显著性意义(P>0.05)。停药2周后可逆性观察，未发现迟缓性毒性。3.7皮肤刺激性实验该药液对家兔完整皮肤和破损皮肤均无明显刺激性。
3.8粘膜刺激性实验未见全身毒性反应，肉眼观察未发现阴道分泌物、粘膜充血及水肿反应，刺激反应评分均为0，病理组织学观察亦未见异常的病理改变。
3.9主动皮肤过敏实验(AcA)洗液一号外用未引起豚鼠皮肤过敏反应。
4结论
洗液一号具有抑菌、抗炎、止痒作用。临床外用剂量安全。
5讨论
阴道炎是不同病原茵侵袭引起的多种阴道粘膜炎性疾病的总称，是最常见的一类妇科疾病。常表现为外阴瘙痒、红、肿、痛，或局部糜烂，阴道分泌物增多，伴有尿频、尿痛等症状。局部瘙痒不仅严重影响患者的正常生活，瘙痒还可引起局部感染加重。祖国医学认为该病主要是湿热或寒湿下注所致。中西医治疗均以局部用药为主，通过抑菌、抗炎、止痒达到缓解症状，根治病因的目的。
洗液一号以苦参、黄柏、老鹳草、白花蛇舌草、白鲜皮、芦荟等16味中药组成，苦参杀虫止痒，清热解毒为其君药，辅以黄柏清热燥湿，老鹳草、白花蛇舌草、白鲜皮祛风杀虫止痒，佐助药芦荟清肝经湿热、解毒杀虫。诸药合用，共奏清热解毒、杀虫止痒之功。根据现代药理研究，方中诸药均有广谱抗菌及抗炎作用，对真菌及滴虫也均有较好的抑制效果。其它如苦参能抗溃疡，芦荟有修复和保护阴部皮肤黏膜，促进伤口愈合等作用。本实验结果表明：洗液一号外用对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、真菌中的白色念珠菌和石膏样小孢子菌均有不同程度的抑菌作用，同时还具有抗炎和止痒作用，该制剂的皮肤毒性实验未见明显毒性，为临床运用提供了实验依据。多年的临床观察结果也表明：洗液一号能治疗各种妇女阴道炎、皮肤病，尤其对霉菌性阴道炎具有比较明显的临床疗效，总有效率达98％。未见明显的毒副作用。由此可见，洗液一号对治疗妇女阴道炎，是一种安全有效的中药制剂。其药理作用机制还有待于进一步研究。
关键词：洗液一号；阴道炎；抑菌；抗炎；止痒；皮肤毒性
中图分类号：R285.5
文献标识码：A
文章编号：1007—2349(2007)06—0038—03
洗液一号是攀枝花市中心医院用于临床多年治疗妇女阴道炎的院内制剂。为了探求洗液一号的主要药理作用及客观评价其安全性，对洗液一号进行了体外抑菌、抗炎、止痒等药效学及皮肤、粘膜毒性的实验研究，现报道如下。
1材料
1.1动物ICR封闭群小鼠，体重(21±2)g，动物级别；清洁级，合格证号：云卫动管9806号。SD大鼠，体重(190±20)g，动物级别：清洁级，合格证号：云卫动管1305号。家兔，体重1.9～2.1kg，动物级别：普通级，合格证号：云卫动管0001208。豚鼠，体重250～300g，动物级别：普通级。均由昆明医学院重点实验室及动物科提供。
1.2药物及试剂洗液一号，浓度67％，攀枝花市中心医院提供，批号：20010411。临床用量用法：150ml／次，温水稀释至500～1000mI(含原生药8g／m1)，每日3次，外洗。洁尔阴，四川省成都思威公司制药厂，批号：010703；二甲苯，汕头市达濠精细化学品公司，批号：20000802。
1.3仪器电子分析天平，型号：BOSCH—SAE200，德国；足跖容积测量仪(自制)。
2方法
2.1最低抑菌浓度(MIC)测定以供试品无菌取药lml(洁尔阴原浓度，洗液一号67％浓度)，用无菌肉汤lml作倍比稀释，采用液体试管抑菌法(检测管8支，药物对照管1支，细菌对照管1支)，加入菌量0.1ml(3X106／m1)，培养18小时，然后将以上培养物分别定量转种至琼脂平板中培养18小时，观察记录实验结果。
2.2洗液一号对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 参照文献，将50只小鼠随机分为5组，每组10只。各组分别为：对照组(蒸馏水)；洁尔阴组(30％)；洗液一号高、中、低剂量组(67％、34％、17％，)。实验当日各组小鼠右耳前后两面涂药一次(O.1m1)，对照组涂以等量蒸馏水。1h后各给药组以蒸馏水洗去药液，用于棉球擦净。采用二甲苯(25μl／每耳)致小鼠耳廓肿胀法，观察记录各组小鼠左右耳片重量，计算肿胀度(即左右耳片重量之差值)，并求出抑肿率。
2.3洗液一号对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响参照文献将50只大鼠随机分为5组，每组10只。分组同方法
2.2。涂药前以改良容积法测定各组大鼠右后足(踝关节以下)体积，然后各组大鼠右后足跖部涂药0.2mI／只，对照组涂以等量蒸馏水，1h后给各组大鼠右后足跖皮下注射角叉菜胶(0.05ml／只)致炎，同时再涂药一次(对照组仍涂以等量蒸馏水)，分别于致炎后1、2、3、4、5h用改良容积法测量各组大鼠的右后足体积。计算肿胀度(即致炎前后足跖体积的差值)，并求出抑肿率。
2.4洗液一号对磷酸组织胺致豚鼠搔痒作用的影响参照文献将豚鼠随机分为4组，每组8只。分组同方法2.2。于试验前一日将各组豚鼠右后足背剪毛，分别外涂相应药物或蒸馏水(0.1ml／100g)。试验当日用砂纸擦伤豚鼠右后足背部剪毛处，面积约2cm2，局部再次涂相应药物或蒸馏水(0.1ml／100g)。10min后，用0.1％磷酸组织胺分别滴在各组豚鼠的创面处(0.05ml／只／次)，此后每隔3min滴一次，直至出现豚鼠回头舔右后足擦伤皮肤动作为止。记录并比较各组涂抹组织胺次数及致痒阈(最后出现豚鼠回头舔右后足时所给予的磷酸组织胺累积用量)。
2.5皮肤急性毒性试验体重(20±2)g小鼠，雌雄各半。参照文献，随机分为5组，每组10只，洗液一号给小鼠一次皮下注射给药(试药剂量范围：20～160g／kg；组距：1：0.5943;给药体积：0.1m／10g)，连续观察7天内动物毒性反应及死亡情况，并用点斜法计算LD50及LD50的95％可信限。
2.6皮肤长期毒性试验体重(155±10)g大鼠，雌性。参照文献，设高、中、低3个剂量组，每组动物30只。高、中、低三个剂量浓度分别为200％、100％、20％(该浓度相当于临床推荐用药浓度的10、5、1倍)。洗液一号给雌性大鼠皮肤、粘膜(大腿内侧、阴道、会阴、肛门周围)涂药，连续涂药21天(为临床验证用药周期的3倍)。
2.7皮肤刺激性实验1.9～2.1kg家兔8只，雌雄各半。参照文献，随机分为完整和破损皮肤2组，采用同体自身对比法，用赋形剂作对照，观察67％洗液一号Iml外用对家兔完整皮肤和破损皮肤的刺激作用。
2.8粘膜刺激性实验参照文献将1.9～2.1kg雌性家兔，随机分为受试组与对照组，每组4只分别阴道注入洗液一号和灭菌生理盐水(0.2ml／只／次)，每隔1h1次，共计5次。观察其有无全身毒性反应。24h后处死家兔，肉眼和镜检观察阴道粘膜有无充血和水肿等反应。如有死亡则对主要脏器进行病理检查。
2.9主动皮肤过敏实验(ACA)，将250～300g豚鼠30只随机分为3组，受试药(67％洗液一号)组、阴性对照(清洁饮用水)组及阳性对照(2、4二硝基氯代苯)组，每组10只，雌雄兼用。进行致敏与激发试验(受试区3X 3cm2，受试物量为0.2m1)。按皮肤过敏反应评分标准对皮肤红斑、水肿进行评分。计算致敏反应发生率。按皮肤致敏性评价标准对皮肤致敏性进行评价。
2.10统计方法采用SPSS8.0统计软件对实验数据进行方差分析。
3结果
3.1最低抑菌浓度(MIC)测定洗液一号对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、真菌中的白色念珠菌和石膏样小孢子菌均有不同程度的抑菌作用。对金黄色葡萄球菌及变形杆菌抑菌作用效果尤为显著，MIC与洁尔阴接近。结果见表1。
3.3洗液一号对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响洗液一号高、中低剂量组能明显抑制角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀，与阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，结果见表3。
3.4洗液一号对磷酸组织胺致豚鼠瘙痒作用的影啊 洁尔阴组能明显提高豚鼠致痒阈，与对照组比较差异有非常显著 性意义(P<0.01)；洗液一号高、中、低剂量组有明显提高豚鼠致痒阈的作用，与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05)见表4。
3.5皮肤急性毒性试验洗液一号小鼠皮下注射给药，测得其LD50=77.45g／kg，LD50的95％可信限为63.21g／kg～94.88g／kg。相当于临床推荐成人外用量1.67g／kg的46倍。本品临床应用为皮肤、粘膜外用剂，吸收至皮下者极少，故可认为本品外用安全低毒。
3.6皮肤长期毒性试验全部动物健康存活，生长发育和行为活动未见明显异常反应。体重随时间的推移各组均相应增加。血液学、血液生化学检测的各项指标均在正常范围。心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、肾上腺、甲状腺、胸腺、子宫、卵巢和涂药部位皮肤、粘膜等重要脏器组织，肉眼观察未见异常，病理组织学检查亦未发现毒性损害。各组间脏器系数差异无显著性意义(P>0.05)。停药2周后可逆性观察，未发现迟缓性毒性。3.7皮肤刺激性实验该药液对家兔完整皮肤和破损皮肤均无明显刺激性。
3.8粘膜刺激性实验未见全身毒性反应，肉眼观察未发现阴道分泌物、粘膜充血及水肿反应，刺激反应评分均为0，病理组织学观察亦未见异常的病理改变。
3.9主动皮肤过敏实验(AcA)洗液一号外用未引起豚鼠皮肤过敏反应。
4结论
洗液一号具有抑菌、抗炎、止痒作用。临床外用剂量安全。
5讨论
阴道炎是不同病原茵侵袭引起的多种阴道粘膜炎性疾病的总称，是最常见的一类妇科疾病。常表现为外阴瘙痒、红、肿、痛，或局部糜烂，阴道分泌物增多，伴有尿频、尿痛等症状。局部瘙痒不仅严重影响患者的正常生活，瘙痒还可引起局部感染加重。祖国医学认为该病主要是湿热或寒湿下注所致。中西医治疗均以局部用药为主，通过抑菌、抗炎、止痒达到缓解症状，根治病因的目的。
洗液一号以苦参、黄柏、老鹳草、白花蛇舌草、白鲜皮、芦荟等16味中药组成，苦参杀虫止痒，清热解毒为其君药，辅以黄柏清热燥湿，老鹳草、白花蛇舌草、白鲜皮祛风杀虫止痒，佐助药芦荟清肝经湿热、解毒杀虫。诸药合用，共奏清热解毒、杀虫止痒之功。根据现代药理研究，方中诸药均有广谱抗菌及抗炎作用，对真菌及滴虫也均有较好的抑制效果。其它如苦参能抗溃疡，芦荟有修复和保护阴部皮肤黏膜，促进伤口愈合等作用。本实验结果表明：洗液一号外用对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、真菌中的白色念珠菌和石膏样小孢子菌均有不同程度的抑菌作用，同时还具有抗炎和止痒作用，该制剂的皮肤毒性实验未见明显毒性，为临床运用提供了实验依据。多年的临床观察结果也表明：洗液一号能治疗各种妇女阴道炎、皮肤病，尤其对霉菌性阴道炎具有比较明显的临床疗效，总有效率达98％。未见明显的毒副作用。由此可见，洗液一号对治疗妇女阴道炎，是一种安全有效的中药制剂。其药理作用机制还有待于进一步研究。