【摘 要】
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制备α1,3-半乳糖基转移酶(αl,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础。在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山
【机 构】
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四川农业大学,动物遗传育种研究所; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室;
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划“973计划”(2011CBA01004);中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2011cj-10-2)
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制备α1,3-半乳糖基转移酶(αl,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础。在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山小型猪基础上,建立GGTA1+/-猪耳成纤维细胞系。利用特异性结合α1,3Gal的药物GSI-B4联合免疫磁珠筛选,成功分离出自发杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)的双等位基因敲除(GGTA1-/-)耳成纤维细胞。单细胞克隆培养与PCR鉴定后,以GGTA1-/-细胞为核供体,体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎并移植。先后将3 122枚重构胚移植到13头受体母猪,其中4头怀孕,产仔12头。采用PCR和Southern blotting进行GGTA1基因型检测,11头为GGTA1-/-猪;流式细胞术分析表明,GGTA1-/-仔猪耳成纤维细胞不表达α1,3Gal。获得能克服异种器官超急性排斥反应(HAR)的GGTA1-/-猪,不仅为异种器官供体的进一步基因修饰提供了平台,也为异种移植临床前研究提供了宝贵资源。
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