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目的：设计一种弹回引物荧光PCR方法鉴定军团菌属和嗜肺军团菌。方法通过分析军团菌16S rRNA基因序列，采用生物信息学方法设计引物，优化实验条件，对方法的特异性、灵敏度进行评估，并对186株环境军团菌分离株与15份环境水样进行鉴定。结果经弹回引物检测，军团菌属菌株在85℃～86℃处有扩增子熔解峰，嗜肺军团菌在71℃处有探针结合区熔解峰，非军团菌未检测到熔解峰。弹回引物对标准菌株DNA与模拟水样灵敏度分别为1 ng／μl与（1×103～1×104）／ml。弹回引物对环境分离株验证实验中，成功鉴定了186株军团菌和44株嗜肺军团菌；对15份环境水样直接检测，检出12份军团菌属阳性水样与4份嗜肺军团菌阳性水样。结论弹回引物荧光PCR方法可用于军团菌属和嗜肺军团菌的鉴定，具有较高的特异性与灵敏度。