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摘 要：为了比较牛大力多糖在不同地理种源、不同类型、不同植株部位和不同采收季节时间差异，对广西钦州市、隆安县、上林县、天峨县4个野生种源进行多糖含量测定，以筛选出最佳牛大力种源、用药部位和采收季节。结果表明，上林县蔓生型牛大力多糖含量明显多于其他3个县直立型牛大力，其次为隆安县直立型牛大力，天峨县的多糖含量最少；多糖含量最高的部位为根部，茎次之，叶的含量最少；牛大力在冬季采收，多糖含量显著高于夏季采收。
关键词：牛大力 种源 化学成分 多糖
牛大力（Millettia speciosa Champ.）为豆科（Leguminosae）崖豆藤属（Millettia Wight et Arn.）美丽崖豆藤的块根，又称山莲藕、牛古大力、大莲藕、倒吊金钟等。为岭南地区著名的药食两用植物 [1]，主要成分为牛大力多糖，具有补肺滋肾、清热止咳、舒筋活络、提高免疫、抗炎、抗氧化和清除自由基作用和抗疲劳的作用[2-4]，主治肺虚咳嗽、咳血、肾虚、腰膝酸痛、遗精、白带、风湿痹痛、跌打损伤、慢性肝炎等[6-9]，同时毒副作用小，性质稳定、不易变性失活[10]，主要分布于广西、海南和广东等省区 [11]，有直立和蔓生2种类型 [12]。随着市场需求的不断增大，种植面积成倍增加，选育优良牛大力种源和类型成为当前急需解决的关键问题，但相关研究报道极少。牛大力多糖是评价牛大力品质的一个重要指标，因此，拟研究通过对不同种源的牛大力多糖含量测定，为牛大力的选育和人工栽培提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 试验材料
试验材料分别为广西钦州市、隆安县、上林县、天峨县4个市（县）5年生及以上的野生牛大力，其中上林县种源有蔓生和直立型2种类型，其他3个市（县）均为直立型牛大力。采收时间为2014年8月和12月。洗净脏物和泥土，自然晒干后用高速粉碎机将植株的根、茎、叶分别打粉，选取过40目标准筛后的粉末作为提取材料。
试验材料经广西壮族自治区药用植物园白隆华研究员鉴定，为豆科崖豆藤属牛大力（Millettia speciosa Champ.）。
1.2 主要仪器与试剂
主要仪器：北京博医康实验仪器有限公司FD-1A-50冷冻干燥器；北京医用离心机厂LG16-W离心机；Perkin Elmer Lamb-da35紫外光谱仪；Mettler Toledo AL204分析天平。
主要试剂：乙酸乙酯、正丁醇、苯酚、浓硫酸和葡萄糖，均为天津大茂化学试剂厂生产，纯度为分析纯；蒸馏水。
1.3 试验方法
1.3.1 多糖提取和待测液制备
精确称取牛大力根、茎、叶粉末样品500 g，在60℃水浴条件下，用85 %乙醇溶液提取5次，每次0.6 L。合并提取液，减压浓缩至80 mL，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，冷冻干燥，最后获得棕红色浸膏即为牛大力多糖，置于干燥器中备用。
精确称取上述制得的牛大力多糖各20.8 mg，溶解并分别定容至250 mL，待测量。
1.3.2 标准曲线的绘制
参照文献方法[2] ，精确称取葡萄糖10.0 mg，溶解后定容至250 mL作为标准液。分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL标准液，再分别用蒸馏水补足至2 mL。再加入6 %苯酚溶液1.0 mL和浓硫酸5.0 mL，静止10 min，摇匀，室温下静置20 min，然后在490 nm波长处测量吸光度。
以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：
Y=0.0080X 0.005 （r=0.997）
1.3.3 牛大力多糖测量
分别吸取0.2、0.6、1.2 mL牛大力样品溶液，用蒸馏水补足至2 mL（对照用2 mL蒸馏水），再加入6 %苯酚溶液1.0 mL和浓硫酸5.0 mL，静止10 min，摇匀，室温下静置20 min，然后在490 nm波长处测量吸光度。按标准曲线计算平均浓度值，再按以下公式计算多糖含量：
多糖含量（%）=[（C×8）/V] ×250÷20.8 ×100
C：根据标准曲线方程算出平均浓度
V：样品体积
2 结果与分析
2.1 不同牛大力种源根部多糖含量差异
对2014年12月采收的4个种源，进行牛大力多糖含量测定，结果见表1。不同牛大力种源根的多糖含量差异明显，来源为隆安和上林的含量较高，分别为 17.8 %和17.2 %，天峨县的最低，只有5.5 %，约为隆安和上林产牛大力块根多糖含量的1/3左右，差异达显著水平。
2.2 不同植株类型、部位牛大力多糖含量的差异
直立型牛大力和蔓生型藤本牛大力是目前栽培的2个类型，2014年8月，分别取上林县直立型和蔓生型2种药材的根、茎和叶进行多糖含量分析，结果见表2。从表中可看出，不管是直立型还是蔓生型类型，多糖含量高低的部位均依次为根、茎、叶，根部的量均不低于6.00 %，而茎在3.50 %左右，叶较低，均不超过1.60 %。而在不同植株类型中，蔓生型根、茎、叶中牛大力多糖的含量均高于直立型。
2.3 不同采收时期对多糖含量的影响
上林县直立型和蔓生型2种植株在8月和12月采收的根部多糖含量结果见表3。可见不同采收时间牛大力根部多糖的含量差异明显（表3）。在冬季12月采收，直立型牛大力和蔓生型藤本牛大力2个类型的多糖含量分别为17.8 %和17.2 %，明显高于8月份采收的含量（分别为6.08 %和6.58 %），即12月份的牛大力多糖含量显著高于8月份。这可能与春、夏、秋初季节是植物营养生长时期，而冬季是植物营养成分积累时期有关。这与传统根茎类药材在冬季采收是一致的[12]。但在同一季节采集，直立型和蔓生型根部多糖含量差异不显著。 3 结论
在试验的4个种源中，隆安县和上林县牛大力种源的多糖含量较高，表明原产地的土壤、湿度、光照、温度、pH值等环境因素对牛大力多糖积累有明显的影响，这与段左俊等[13]研究结果相同；而蔓生型和直立型的多糖含量差异不明显。牛大力多糖含量在根、茎、叶均有分布，含量高低依次为根、茎、叶。尽管在茎和叶中，牛大力多糖的含量相对较低，但仍可加以利用 [14-15]。
参考文献
[1] 徐立，李志英. 牛大力种苗繁育及高产栽培技术[M]. 北京：中国农业出版社，2011：1-2.
[2] 黄江艳，唐专辉，李典鹏，等. 牛大力多糖含量的测定[J]. 安徽农业科学，2013，41（3）：1180，
1195.
[3] 吕世静， 黄槐莲， 吴宋厦.牛大力对抗体及IL-2产生的影响[J]. 上海免疫学杂志，1997， 17（1）：56.
[4] 郑元升. 牛大力多糖的提取及其药理活性研究[D]. 广州：暨南大学，2009，3.
[5] 国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999：
571-572.
[6] 刘丹丹，唐立海，王艳，等. 牛大力祛痰、镇咳和平喘作用的实验研究[J]. 广州中医药大学学报，2009，26（3）：266-269.
[7] 韦翠萍，刘丹丹，唐立海. 牛大力对小鼠免疫功能的影响[J]. 广州中医药大学学报，2009，26（6）：539-542.
[8] 石焱，弓小雪，那 婕. 牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用[J]. 临床军医杂志，
2008，36（4）：530-532.
[9] 周添浓，刘丹丹，唐立海. 牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 时珍国医国药，2008，20（10）：2585-2587.
[10] 许慧，等. 植物多糖生物活性的研究进展[J]. 福建医科大学学报，2010，44（1）：79-82.
[11] 徐立，郝宏刚，李志英. 牛大力块根cDNA文库的构建及EST分析[J]. 基因组学与应用生物，2013，32（3）： 404-408.
[12] 陆善旦，黄辉，杨福顺，等. 野生中药材采集加工技术[M]. 南宁：广西科学技术出版社，
1999：3.
[13] 段左俊，曾祥全，陈飞飞，等. 牛大力的生物学特性及其栽培管理[J]. 热带林业，2011，39
（4）：22-25.
[14] 赖富丽，王祝年，王建荣，等. 牛大力藤叶脂溶性成分的GC-MS分析[J]. 热带作物学报，
2009，30（5）：714-717.
[15] 王茂媛，赖富丽，王建荣，等. 牛大力茎的化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发，2013
（25）：53-55.
关键词：牛大力 种源 化学成分 多糖
牛大力（Millettia speciosa Champ.）为豆科（Leguminosae）崖豆藤属（Millettia Wight et Arn.）美丽崖豆藤的块根，又称山莲藕、牛古大力、大莲藕、倒吊金钟等。为岭南地区著名的药食两用植物 [1]，主要成分为牛大力多糖，具有补肺滋肾、清热止咳、舒筋活络、提高免疫、抗炎、抗氧化和清除自由基作用和抗疲劳的作用[2-4]，主治肺虚咳嗽、咳血、肾虚、腰膝酸痛、遗精、白带、风湿痹痛、跌打损伤、慢性肝炎等[6-9]，同时毒副作用小，性质稳定、不易变性失活[10]，主要分布于广西、海南和广东等省区 [11]，有直立和蔓生2种类型 [12]。随着市场需求的不断增大，种植面积成倍增加，选育优良牛大力种源和类型成为当前急需解决的关键问题，但相关研究报道极少。牛大力多糖是评价牛大力品质的一个重要指标，因此，拟研究通过对不同种源的牛大力多糖含量测定，为牛大力的选育和人工栽培提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 试验材料
试验材料分别为广西钦州市、隆安县、上林县、天峨县4个市（县）5年生及以上的野生牛大力，其中上林县种源有蔓生和直立型2种类型，其他3个市（县）均为直立型牛大力。采收时间为2014年8月和12月。洗净脏物和泥土，自然晒干后用高速粉碎机将植株的根、茎、叶分别打粉，选取过40目标准筛后的粉末作为提取材料。
试验材料经广西壮族自治区药用植物园白隆华研究员鉴定，为豆科崖豆藤属牛大力（Millettia speciosa Champ.）。
1.2 主要仪器与试剂
主要仪器：北京博医康实验仪器有限公司FD-1A-50冷冻干燥器；北京医用离心机厂LG16-W离心机；Perkin Elmer Lamb-da35紫外光谱仪；Mettler Toledo AL204分析天平。
主要试剂：乙酸乙酯、正丁醇、苯酚、浓硫酸和葡萄糖，均为天津大茂化学试剂厂生产，纯度为分析纯；蒸馏水。
1.3 试验方法
1.3.1 多糖提取和待测液制备
精确称取牛大力根、茎、叶粉末样品500 g，在60℃水浴条件下，用85 %乙醇溶液提取5次，每次0.6 L。合并提取液，减压浓缩至80 mL，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，冷冻干燥，最后获得棕红色浸膏即为牛大力多糖，置于干燥器中备用。
精确称取上述制得的牛大力多糖各20.8 mg，溶解并分别定容至250 mL，待测量。
1.3.2 标准曲线的绘制
参照文献方法[2] ，精确称取葡萄糖10.0 mg，溶解后定容至250 mL作为标准液。分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL标准液，再分别用蒸馏水补足至2 mL。再加入6 %苯酚溶液1.0 mL和浓硫酸5.0 mL，静止10 min，摇匀，室温下静置20 min，然后在490 nm波长处测量吸光度。
以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：
Y=0.0080X 0.005 （r=0.997）
1.3.3 牛大力多糖测量
分别吸取0.2、0.6、1.2 mL牛大力样品溶液，用蒸馏水补足至2 mL（对照用2 mL蒸馏水），再加入6 %苯酚溶液1.0 mL和浓硫酸5.0 mL，静止10 min，摇匀，室温下静置20 min，然后在490 nm波长处测量吸光度。按标准曲线计算平均浓度值，再按以下公式计算多糖含量：
多糖含量（%）=[（C×8）/V] ×250÷20.8 ×100
C：根据标准曲线方程算出平均浓度
V：样品体积
2 结果与分析
2.1 不同牛大力种源根部多糖含量差异
对2014年12月采收的4个种源，进行牛大力多糖含量测定，结果见表1。不同牛大力种源根的多糖含量差异明显，来源为隆安和上林的含量较高，分别为 17.8 %和17.2 %，天峨县的最低，只有5.5 %，约为隆安和上林产牛大力块根多糖含量的1/3左右，差异达显著水平。
2.2 不同植株类型、部位牛大力多糖含量的差异
直立型牛大力和蔓生型藤本牛大力是目前栽培的2个类型，2014年8月，分别取上林县直立型和蔓生型2种药材的根、茎和叶进行多糖含量分析，结果见表2。从表中可看出，不管是直立型还是蔓生型类型，多糖含量高低的部位均依次为根、茎、叶，根部的量均不低于6.00 %，而茎在3.50 %左右，叶较低，均不超过1.60 %。而在不同植株类型中，蔓生型根、茎、叶中牛大力多糖的含量均高于直立型。
2.3 不同采收时期对多糖含量的影响
上林县直立型和蔓生型2种植株在8月和12月采收的根部多糖含量结果见表3。可见不同采收时间牛大力根部多糖的含量差异明显（表3）。在冬季12月采收，直立型牛大力和蔓生型藤本牛大力2个类型的多糖含量分别为17.8 %和17.2 %，明显高于8月份采收的含量（分别为6.08 %和6.58 %），即12月份的牛大力多糖含量显著高于8月份。这可能与春、夏、秋初季节是植物营养生长时期，而冬季是植物营养成分积累时期有关。这与传统根茎类药材在冬季采收是一致的[12]。但在同一季节采集，直立型和蔓生型根部多糖含量差异不显著。 3 结论
在试验的4个种源中，隆安县和上林县牛大力种源的多糖含量较高，表明原产地的土壤、湿度、光照、温度、pH值等环境因素对牛大力多糖积累有明显的影响，这与段左俊等[13]研究结果相同；而蔓生型和直立型的多糖含量差异不明显。牛大力多糖含量在根、茎、叶均有分布，含量高低依次为根、茎、叶。尽管在茎和叶中，牛大力多糖的含量相对较低，但仍可加以利用 [14-15]。
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[3] 吕世静， 黄槐莲， 吴宋厦.牛大力对抗体及IL-2产生的影响[J]. 上海免疫学杂志，1997， 17（1）：56.
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[7] 韦翠萍，刘丹丹，唐立海. 牛大力对小鼠免疫功能的影响[J]. 广州中医药大学学报，2009，26（6）：539-542.
[8] 石焱，弓小雪，那 婕. 牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用[J]. 临床军医杂志，
2008，36（4）：530-532.
[9] 周添浓，刘丹丹，唐立海. 牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 时珍国医国药，2008，20（10）：2585-2587.
[10] 许慧，等. 植物多糖生物活性的研究进展[J]. 福建医科大学学报，2010，44（1）：79-82.
[11] 徐立，郝宏刚，李志英. 牛大力块根cDNA文库的构建及EST分析[J]. 基因组学与应用生物，2013，32（3）： 404-408.
[12] 陆善旦，黄辉，杨福顺，等. 野生中药材采集加工技术[M]. 南宁：广西科学技术出版社，
1999：3.
[13] 段左俊，曾祥全，陈飞飞，等. 牛大力的生物学特性及其栽培管理[J]. 热带林业，2011，39
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[14] 赖富丽，王祝年，王建荣，等. 牛大力藤叶脂溶性成分的GC-MS分析[J]. 热带作物学报，
2009，30（5）：714-717.
[15] 王茂媛，赖富丽，王建荣，等. 牛大力茎的化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发，2013
（25）：53-55.