【摘 要】
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目的:克隆桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因,并对其进行序列分析.方法:从桂北五步蛇毒腺中抽提总RNA,采用一步法(RT-PCR和PCR在同一管内进行)扩增出纤溶酶金属蛋白酶基因,利用
【机 构】
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广西医科大学微生物教研室南宁,Dept.of Biochemistry and Molecular Biology,广西医科大学蛇毒研究所
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目的:克隆桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因,并对其进行序列分析.方法:从桂北五步蛇毒腺中抽提总RNA,采用一步法(RT-PCR和PCR在同一管内进行)扩增出纤溶酶金属蛋白酶基因,利用平端连接的方法将PCR扩增产物克隆至pGEM-T Easy 载体,挑选白色菌落,用酶切和PCR法对其进行鉴定,直接利用纯化PCR产物进行测序或提取阳性菌落进行测序.结果:RT-PCR和PCR扩增得到一600bp产物,并被克隆及测序.结论:该实验产物和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较,有90.6%的同源性,这为进一步研究该产物的表达,以及表达产物的活性提供条件.
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