基于episomal CRISPR/Cas9载体的基因敲入方法

来源 :中山大学学报（医学版） | 被引量 : 0次 | 上传用户：kocis2815

【摘要】

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【目的】研究一种在哺乳动物细胞中高效的基因敲入方法,比较带有oriP-EBNA1序列的episomal CRISPR/Cas9载体与普通CRISPR/Cas9载体的基因敲入效率是否有差别。【方法】首先利

【作者】

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邹征伟赖兴强李伟强

【机构】

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中山大学中山医学院干细胞与组织工程研究中心

【出处】

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中山大学学报（医学版）

【发表日期】

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2018年5期

【关键词】

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CRISPR/Cas9 episomal载体敲除敲入 CRISPR/Cas9 episomal vectors knockout knockin

【基金项目】

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国家自然科学基金(81570487),中山大学青年教师重点培育项目(17ykzd07)

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【目的】研究一种在哺乳动物细胞中高效的基因敲入方法,比较带有oriP-EBNA1序列的episomal CRISPR/Cas9载体与普通CRISPR/Cas9载体的基因敲入效率是否有差别。【方法】首先利用慢病毒载体构建稳定表达红色荧光蛋白DsRedE2的人胚肾细胞系(293FT)与人诱导多能干细胞系(hiPS);利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计和合成靶向DsRedE2的向导RNA(sgRNA),分别克隆至带有oriP-EBNA1的episomal CRISPR/Cas9敲除载体与普通CRISP

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