【摘 要】
：
目的 探讨miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1(YAP1)基因对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响.方法 体外分离培养hDPSCs细胞,将miR-27a-3p模拟物(miR-27a-3p mimics,过表达组)、miR-27a-3p抑制剂(miR-27a-3p inhibitor,敲低组)、miR-NC(对照组)分别转染至hDP-SCs细胞中,检测miR-27a-3p表达水平的改变对YAP1表达的影响.采用TargetScan数据库检索miR-27a-3p的靶基因.应用双荧光素酶报告基因
【机 构】
：
安徽医科大学口腔医学院,安徽省口腔疾病研究中心实验室,合肥230032
论文部分内容阅读
目的 探讨miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1(YAP1)基因对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响.方法 体外分离培养hDPSCs细胞,将miR-27a-3p模拟物(miR-27a-3p mimics,过表达组)、miR-27a-3p抑制剂(miR-27a-3p inhibitor,敲低组)、miR-NC(对照组)分别转染至hDP-SCs细胞中,检测miR-27a-3p表达水平的改变对YAP1表达的影响.采用TargetScan数据库检索miR-27a-3p的靶基因.应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和YAP1的靶向关系.将miR-27a-3p mimics、miR-NC转染到hDPSCs特定时间后收集细胞,应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、Western blot等检测经典的成骨标志物骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成骨转录因子-2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、YAP1 mRNA和蛋白表达水平.应用MTT比色法验证miR-27a-3p和YAP1对细胞增殖活性的影响.结果 过表达组hDPSCs细胞中miR-27a-3p的表达水平较对照组显著上调(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平下调(P＜0.05).而敲低组miR-27a-3p的表达水平较对照组明显下降(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平增高(P＜0.05).生物信息学分析表明,miR-27a-3p作用于YAP1的3\'UTR区,双荧光素酶报告基因实验验证了YAP1是miR-27a-3p的靶基因.qRT-PCR、Western blot检测显示,与对照组相比,miR-27a-3p过表达时hDPSCs中BMP-2、RUNX2、OPN mRNA和蛋白的表达水平上调(P＜0.05).MTT检测显示,miR-27a-3p过表达可明显上调hDPSCs增殖率(P＜0.05),而YAP1过表达则会降低hDPSCs的增殖率(P＜0.05).结论 miR-27a-3p可能通过靶向调控YAP1促进hDPSCs成骨分化.
其他文献
[目的/意义]本文旨在探究台湾亚洲交流基金会在台湾当局“新南向政策”中的角色与功能,把握智库与台湾当局在“新南向政策”中的互动关系,以期为中国大陆应对台湾当局开展的智库“公共外交”提供一定参考.[方法/过程]本文将台湾亚洲交流基金会作为研究对象,对其产生背景、角色定位、组织活动等进行梳理和研究,分析其在“新南向政策”中的影响和作用.[结果/结论]台湾亚洲交流基金会在台湾当局“新南向政策”中扮演着政策中介者、“伙伴关系”建构者、“国际舞台”创造者的角色,发挥着整合台湾社会资源、助推台当局“新南向政策”以拓展
目的 通过营养胁迫构建内质网应激和自噬模型并评价其对肿瘤增殖和凋亡的影响.方法 以含1％血清的低糖DMEM培养基分别处理HepG2细胞、Huh7细胞不同时间,Western blot检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子-6(ATF6)、必需肌醇1 α(IRE1α)、蛋白激酶RNA样内质网激蛋白(PERK)和自噬蛋白轻链3(LC3)、核孔蛋白62(P62)、自噬相关蛋白1(Beclin-1)的表达.免疫荧光双染观察自噬蛋白LC3和GRP78的共表达情况.分别采用流式细胞术和C
目的 探讨有机阴离子转运蛋白1(OAT1)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)吸收甲氨蝶呤(MTX)以及对其增殖和迁移的影响.方法 对CIA大鼠FLS使用转染技术上调OAT1的表达,并用Western blot、RT-qPCR方法验证转染效率.将FLS分为阴性对照组(NC组)、Overexpress组,并用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(20 ng/ml)刺激.另取正常大鼠FLS为对照组(Control),给予同浓度(100 ng/ml) MTX和OAT1特异性底物对氨基马尿酸(PA
目的 研究Ptpn11E76K/+;Mx1-Cre+激活突变骨髓细胞来源的外泌体在骨髓增殖性肿瘤(MPN)进程中发挥的作用.方法 分离PtpnllE76K/+;Mx1-Cre+激活突变骨髓细胞来源的外泌体,与含有正常造血干细胞(HSCs)的LSK细胞进行体外培养,通过尾静脉将突变骨髓细胞来源的外泌体注射到野生C57BL小鼠体内,观察外泌体在体内外发挥的作用,最后通过细胞因子试剂盒检测突变骨髓细胞来源的外泌体发生的改变.结果 突变骨髓细胞来源的外泌体会携带相关炎性因子,加速正常HSCs的髓系分化能力,导致正
目的 探讨Nav1.6-RNAi对口腔鳞状细胞癌细胞增殖作用的影响,并分析其可能相关机制.方法 使用免疫组化、Western blot和qRT-PCR法检测电压门控钠通道Nav1.6在口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况;将Nav1.6-RNAi转染到人舌鳞癌细胞株(CAL-27细胞)中,使用Western blot法检测Nav1.6、CyclinD1、C-myc、AKT及p-AKT的表达,并通过流式细胞仪检测细胞周期.结果 免疫组化、Western blot和qRT-PCR结果证实Nav1.6在口腔鳞状细胞癌
目的 通过测试负载纳米银的海藻酸钠(SA)细菌纤维素(BC)复合膜的拉伸强度,对金黄色葡萄球菌的抑菌性及其对鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响,探讨其作为新型引导骨组织再生膜的可行性.方法 将SA溶液与BC溶液按比例均匀混合(SA与BC的质量分数比分别为10∶3、10∶5、10∶7、10∶9及纯SA膜),自蒸发成膜,在膜表面通过多巴胺原位还原生成银纳米颗粒(AgNPs).采用力学万能实验机测试各组膜试件抗拉强度.取抗拉强度最大的复合膜试件,用扫描电镜观察微观结构,X射线衍射仪分析成分.用细胞计数试剂盒检测复合膜的
目的 探讨原花青素(PAC)对人牙髓干细胞(hDP-SCs)增殖及成骨分化能力的影响.方法 改良组织块消化法分离培养hDPSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,诱导染色鉴定分化潜能.不同浓度的PAC(0、4、8、16、32 μmol/L)刺激hDPSCs后,通过CCK-8法检测hDPSCs的增殖,细胞骨架染色检测hDPSCs的细胞形态,碱性磷酸酶(ALP)活性检测hDPSCs的ALP活性,荧光定量PCR(q-PCR)检测成骨相关基因核心转录因子2 (Runx-2)、骨形成蛋白2(Bmp-2)和Ⅰ型胶原(Col-
目的 研究外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者阴道乳杆菌黏附功能和其调节局部免疫功能的特点.方法 从VVC患者和健康对照女性阴道分泌物中分离乳杆菌并鉴定.测定两组获得不同乳杆菌菌种(株)与阴道鳞状上皮细胞株VK2/E6E7的黏附功能,并检测在不同乳杆菌存在时,阴道鳞状上皮细胞株VK2/E6E7分泌白介素(IL)-1α、IL-1β、IL-6和IL-8的水平.结果 VVC组的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌和发酵乳杆菌的黏附能力明显低于对照组.与对照组比较,VVC组的卷曲乳杆菌、发酵乳杆菌能上调IL-6和IL-8的水平,
目的 探究RNA结合基序蛋白25(RBM25)在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞功能的影响.方法 利用TCGA数据库分析RBM25在结直肠癌和正常结肠组织中的表达差异及RBM25表达水平与患者预后之间的关系;分别采用qRT-PCR和Western blot检测结直肠癌组织中RBM25在mRNA和蛋白水平的表达情况.将RBM25-siR-NAs转染结直肠癌细胞系HCT 116,采用CCK-8实验、克隆形成实验检测RBM25敲低对结直肠癌细胞生长、增殖的影响;利用TCGA数据库分析RBM25 mRNA表达
目的 探讨嘌呤代谢相关基因与胃癌患者预后的关系.方法 收集胃癌组织标本91例和癌旁组织标本30例,京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析胃癌嘌呤代谢相关通路中的关键基因(KGS),转录组测序筛选胃癌组织与癌旁组织之间的差异表达基因(DEGs),运用一系列数据库,包括基因表达谱分析(GEPIA)和Kaplan-Meier绘图器,研究DEGs在胃癌患者中的独特表达和预后价值.结果 在嘌呤代谢通路上富集85个基因,进行差异基因分析发现差异表达基因25个,上调基因15个,下调基因10个.进一步发现5个差异基