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【目的】建立一种能够应用于临床样本猪瘟病毒（CSFV）检测的快速、简便且标准化程度高的检测技术，以满足畜牧业生产和兽药市场的需求。【方法】根据GenBank中猪瘟病毒及近源病毒的基因组全序列，选择特异保守区域设计了2对猪瘟病毒引物，借助3′端引物碱基错配对PCR扩增效率的影响，优化筛选了能够鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒疫苗的PCR退火温度，经多重试验组合建立了一套鉴别猪瘟强毒和弱毒的多重RT-PCR鉴别诊断方法。【结果】扩增反应条件的确定试验表明，退火温度为55℃；特异性分析表明，从弱毒C株和石门强毒株的基