【摘 要】
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目的 通过转基因方法 使猪的血管内皮细胞表达人DAF蛋白,抑制猪供人移植超急性排斥反应. 方法 体外培养猪腹主动脉内皮细胞,用透射电镜方法 进行鉴定.脂质体转染法将含有人DA
【机 构】
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300211,天津医科大学第二医院泌尿外科研究所
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目的 通过转基因方法 使猪的血管内皮细胞表达人DAF蛋白,抑制猪供人移植超急性排斥反应. 方法 体外培养猪腹主动脉内皮细胞,用透射电镜方法 进行鉴定.脂质体转染法将含有人DAF基因的真核表达载体PSFFV-DAF转染进猪的血管内皮细胞,经G418筛选(浓度为100 mg/L)12 d,获得具有抗性的克隆,进而增殖,传代,保种.通过流式细胞仪检测转染细胞DAF的表达情况.结果 转染了基因的细胞与未转染基因的细胞在流式细胞仪检测中其莹光强度分别为82.18和1.69.转染的细胞5代后其荧光强度为71.96.结论 转染了人DAF基因的细胞荧光强度明显高于对照组.导入的外源基因在细胞内能高效、稳定地表达,为转基因猪的建立奠定一定的基础.
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