里氏木霉GH61家族糖苷酶的高效表达及酶学特性研究

来源 :微生物学通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mdehuh
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【目的】GH61家族糖苷水解酶具有葡聚糖氧化酶活性,通过对葡聚糖链的随机氧化而破坏木质纤维素的结晶结构,从而使木质纤维素容易被纤维素酶降解。重组表达、纯化获得里氏木霉的GH61家族糖苷水解酶(TrGH61,原名为EGⅣ),并研究其在纤维素酶水解木质纤维素中的作用。【方法】通过Overlap PCR将里氏木霉丙酮酸脱羧酶的启动子、纤维二糖水解酶cbh1的信号肽、EGⅣ基因和PDC终止子依次连接构建了里氏木霉的表达盒,通过该表达盒使TrGH61蛋白基因整合到里氏木霉的基因组DNA上进行同源表达。研究表达产物TrGH61的水解活性、与纤维素酶水解协同效应,以及TrGH61作为金属氧化酶的特性研究。【结果】在PDC启动子的作用下,TrGH61得到高效表达,摇瓶培养的表达量达到2.33 g/L。TrGH61有微弱的内切葡萄糖苷酶活性,比活力为0.02 IU/mg,但能显著提高纤维素酶水解稻草粉的活性,协同度最高可达1.998。低浓度的金属离子Cu2+、Co2+和还原性电子供体还原型谷胱甘肽、L-抗坏血酸、焦性没食子酸均能显著促进其水解效应。TrGH61能够降低稻草粉纤维素聚合度和结晶度。【结论】通过PDC启动子可以实现TrGH61蛋白高效组成型表达,TrGH61作为纤维素酶活性促进因子,通过破坏纤维素结晶结构作用机制协同增强纤维素酶水解木质纤维素。
其他文献
在小学语文教学过程中,教师不仅要引导学生掌握扎实的基础知识,还要重视综合能力的培养。对话教学作为新课改模式下的一种教学方法,经常出现在小学语文课堂中,然而目前的小学
探究性化学实验是学生在运用已掌握的化学知识的基础上,通过独立或与他人合作完成实验设计、实验物品准备、实验操作、数据收集、得出结论的科学探索实践行为。教师精心引导学
高温形变热处理是将高温变形与淬火等热处理工序相结合以提高材料力学性能的热处理工艺。对含1.11%C、13.1%Mn、0.42%Si、0.047%P和0.006%S(质量分数)的高锰铸钢试样分别于10
近年来,羊肉掺假事件屡见不鲜,不仅扰乱了经济秩序,同时也危害人们的身体健康。目前对羊肉及其制品掺假进行鉴别的检测技术主要包括感官鉴别技术、免疫学技术、分子生物学技
建筑工程施工阶段的造价控制,重点在于成本的控制。本文运用“赢得值原理”对某工程进行成本的动态分析,及时找出基础工程施工中偏差产生的原因,并提出了适当的措施予以控制。
针对我国农业废弃物种类多、产量大、利用率低及单一物料厌氧发酵产气效率不高且不稳定等问题,本研究选取了典型农业废弃物牛粪、玉米秸秆和城市污水处理厂脱水污泥作为底物,
为解决传统网络感知管理技术不能满足有限资源条件下多样化的业务应用分配问题,在基于Open Flow网络与传统网络的感知方法基础上,设计了一种新型的网络感知管理方案,该方案通
针对哈夫曼编码需要用到指针和结构体而导致使用受到限制的问题,提出一种不用指针和结构体也能进行哈夫曼编码的算法。算法以哈夫曼编码的编码原理为基础,先自底向上得到各个
ISO14001环境管理体系认证,越来越受到企业的关注,它不仅有助于企业实现清洁生产,改变生态环境,且有助于提高企业的管理水平。