【摘 要】
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目的 构建以人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)为永生化基因、loxP为重组位点的可回复性永生化逆转录病毒载体.方法 采用EcoRI、Sal I双酶切
【机 构】
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第三军医大学西南医院内分泌科,第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,第三军医大学西南医院全军感染病研究所,第三军医大学西南医院全军消化病研究所
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目的 构建以人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)为永生化基因、loxP为重组位点的可回复性永生化逆转录病毒载体.方法 采用EcoRI、Sal I双酶切、回收含有EGFP-胸苷激酶融合基因及LoxP序列的逆转录病毒载体pBTGTKlox,将经PCR扩增的IRES序列克隆入其中,构建成pI-GTKlox;将hTERT克隆入pI-GTKlox的EcoR I酶切位点,构建成phTERT-I-GTKlox.进行菌落PCR、酶切、测序鉴定.结果 菌落PCR鉴定5个菌落中2个为阳性克隆.阳性克隆质粒经Eco R I酶切鉴定形成预计的6.5 kb及3.5 kb两个片段,进一步经测序证实插入的hTERT序列无核苷酸突变.结论 成功构建了phTERT-I-GTKlox可回复性永生化逆转录病毒载体,为建立可回复性永生化胰岛细胞奠定了基础.
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