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【摘要】 目的 对大鼠灌胃鱼油30天的安全性进行评价，为其食用安全性提供实验依据。方法 按照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）要求，对SPF级SD种健康大鼠每天灌胃给予25%、50%、100%的鱼油，剂量为0.9、1.8、3.6g/kg BW，相当于人体推荐量的25、50、100倍，进行30d喂养试验和毒理学评价。结果 各剂量组大鼠与对照组相比较，各时点体重、实验期间的总增重、总进食、总食物利用率均无显著性差异，大鼠血象、生化及脏器和脏体比指标均在本实验室正常值范围内，组织病理切片未见异常。结论 鱼油是一种安全的保健食品。
【关键词】 鱼油；毒理学评价；喂养试验；30天
鱼油是鱼体内的全部油脂类物质的总称，它包括体油、肝油和脑油。鱼油不同于其他动物脂肪，一般动物脂肪富含饱和脂肪酸，而鱼油富含多不饱和脂肪酸。鱼油 ω-3 脂肪酸中的EPA（二十碳五烯酸）、DHA（二十二碳六烯酸）含量较高，是鱼油在动物及人体内发挥营养生理功能的主要分子基礎[1]。EPA 和 DHA是人体必须的多元不饱和脂肪酸，这就是人们常说的脑黄金。鱼油具有调节血脂、抗心律失常、抗炎、抗氧化、降糖、抗癌、防治老年性痴呆等多种生理功效[2-5]。鱼油在化工、饲料、药品、保健品等领域都具有广泛的应用[6]。因此对其毒理学安全性评价也越来越受到人们的重视。我们旨在对鱼油进行30 d 喂养试验和毒理学评价，为其食用安全性提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 受试物 精制鱼油，为淡黄色透明液体，批号为20110921，由广东省食品工业研究所提供。使用时用玉米油（金龙鱼牌）稀释，分别配制成25%、50%、100%的溶液进行实验。人体推荐日服量为每日1次、每次2g，以成人体重60kg计算，推荐量约为0.033g/kg BW。
1.1.2 实验动物与环境 南方医科大学实验动物中心提供的SPF级SD种健康大白鼠，生产许可证号：SCXK（粤）2011-0015，质量合格证编号：4402101371，雄性体重：93.1±5.3g，雌性体重：91.4±7.0g；颗粒饲料由广东省医学实验动物中心提供。本实验室SPF级实验动物房；实验动物使用许可证号：SYXK（粤）2008-0011；室温：20℃-24℃，相对湿度：40%RH-70%RH。
1.1.3 主要仪器与试剂 日立7600全自动生化仪和雅培3700全自动血球计数仪检测，试剂均由原仪器生产商供应。
1.2 实验方法 将80只SPF级SD大鼠随机分为 3 个鱼油组及溶剂对照组，每组 20 只，雌雄各半。受试物设0.9、1.8、3.6g/kg BW 3 个剂量组（约相当于人体推荐量的25、50、100倍）。灌胃量为 4ml/kg BW，每日 1 次灌胃给予受试物，溶剂对照组灌胃等量玉米油，连续灌胃 30d，自由饮食，每周记录大鼠进食量2次及体重 1 次，连续观察 30 d。实验结束时取血测定各项指标。
1.2.1 一般情况观察 每天观察动物的外观、行为、毒性表现和死亡情况。每周称体重、进食量，计算每周食物利用率、总食物利用率、总进食量及总增重。
1.2.2 血液学检查 腹主动脉取血测定血红蛋白含量、红细胞计数及白细胞计数，白细胞分类等血液学指标。取血清测定天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）等生化指标。
1.2.3 大体观察及病理组织检查 解剖观察各主要脏器及胸、腹腔大体异常改变。剖解出全部动物的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、睾丸，称重并计算脏器系数。脏器采用 10% 甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE 染色，在光镜下进行组织学检查。
1.3 数据处理 数据用SPSS18.0软件包进行统计分析。
2 结 果
2.1 一般情况 在试验期间内，所有动物均未出现拒食现象，无明显中毒症状，活动和饮食情况正常。各组动物每周食物利用率、总食物利用率、体重和增重与对照组比较，差异均无统计学意义。
2.2 血液学测定结果 各剂量组与对照组比较，各项血液学指标均无显著性差异，见表1、表2。
2.4 脏器重量、脏/体比值：雌、雄性大鼠各剂量组心重、肝重、脾重、肾重、睾丸重及其脏/体比值，与对照组比较均无显著性差异。
2.5 组织病理学检查 大体检查心脏、肝脏、肾脏、胃及小肠、脾脏和性腺等器官肉眼未见病变，故选择高剂量组和对照组动物的肝脏、肾脏、胃及小肠、脾脏和性腺进行组织病理学检查。对照组与高剂量组大鼠的肝脏、肾脏、胃及小肠、脾脏和性腺组织病理学观察结果大致相同，未见与受试物有关的病理改变。
3 讨 论
鱼油中的ω-3型多烯脂肪酸（ω-3 PU FAs），尤其是EPA、DHA为人体所必需的脂肪酸，其降血脂功能已得到大量临床及实验研究的证实。本研究通过30 d 喂养实验，观察到雄性大鼠各剂量组甘油三酯与对照组比较差异虽无显著性意义，但有降低趋势。本研究未发现与鱼油有关的毒性作用的最大剂量，与曾强等[7]对深海鱼油的研究结果一致，即未发现鱼油的亚急性毒性。曾强等[7]对深海鱼油进行急性毒性和遗传毒性的研究，结果发现，深海鱼油对两种性别的大、小鼠经口急性毒性最大耐受量（MTD）均大于15.0 g / kg；Ames 试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠睾丸染色体畸变试验结果均为阴性，表明深海鱼油为无毒级，无遗传毒性，是一种安全的保健食品。尽管如此，但过量摄入也可能会带来某些不良的效果或副作用，有关其长期食用的安全性有待进一步研究，建议食用此类产品应适量控制。
参考文献
[1] 唐武能，邝声耀，唐凌，等.鱼油在饲料中的应用研究[J].四川畜牧兽医，2011（4）：31-33.
[2] 扶志敏，王正.ω-3 多不饱和脂肪酸抗炎机制研究进展[J].医药导报，2009，28（9）：1174-1176.
[3] 刘安军，朱晓芳，郑捷，等.鱿鱼肝脏鱼油成分及其体外抗氧化性的研究[J].现代食品科技，2010（1）：18-21.
[4] Young K.Omega-6（n-6）and omega-3（n-3）fatty acids in tilapia and human health：a review[J].Int J Food Sci Nutr，2009，60（Suppl 5）：203-211.
[5] Muldoon MF，Ryan CM，Sheu L，et al.Serum phospholipid docosa-hexaenonic acid is associated with cognitive functioning during middle a-dulthood[J].J Nutr，2010，140：848-853.
[6] 张云竹，柏 杨，刘小琴，等.海洋鱼油资源开发和应用研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（28）：14005-14007.
[7] 曾强，张静姝，刘忠慧，等.深海鱼油毒理学安全性评价[J].职业与健康，2012，28（13）：1569-1571.
【关键词】 鱼油；毒理学评价；喂养试验；30天
鱼油是鱼体内的全部油脂类物质的总称，它包括体油、肝油和脑油。鱼油不同于其他动物脂肪，一般动物脂肪富含饱和脂肪酸，而鱼油富含多不饱和脂肪酸。鱼油 ω-3 脂肪酸中的EPA（二十碳五烯酸）、DHA（二十二碳六烯酸）含量较高，是鱼油在动物及人体内发挥营养生理功能的主要分子基礎[1]。EPA 和 DHA是人体必须的多元不饱和脂肪酸，这就是人们常说的脑黄金。鱼油具有调节血脂、抗心律失常、抗炎、抗氧化、降糖、抗癌、防治老年性痴呆等多种生理功效[2-5]。鱼油在化工、饲料、药品、保健品等领域都具有广泛的应用[6]。因此对其毒理学安全性评价也越来越受到人们的重视。我们旨在对鱼油进行30 d 喂养试验和毒理学评价，为其食用安全性提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 受试物 精制鱼油，为淡黄色透明液体，批号为20110921，由广东省食品工业研究所提供。使用时用玉米油（金龙鱼牌）稀释，分别配制成25%、50%、100%的溶液进行实验。人体推荐日服量为每日1次、每次2g，以成人体重60kg计算，推荐量约为0.033g/kg BW。
1.1.2 实验动物与环境 南方医科大学实验动物中心提供的SPF级SD种健康大白鼠，生产许可证号：SCXK（粤）2011-0015，质量合格证编号：4402101371，雄性体重：93.1±5.3g，雌性体重：91.4±7.0g；颗粒饲料由广东省医学实验动物中心提供。本实验室SPF级实验动物房；实验动物使用许可证号：SYXK（粤）2008-0011；室温：20℃-24℃，相对湿度：40%RH-70%RH。
1.1.3 主要仪器与试剂 日立7600全自动生化仪和雅培3700全自动血球计数仪检测，试剂均由原仪器生产商供应。
1.2 实验方法 将80只SPF级SD大鼠随机分为 3 个鱼油组及溶剂对照组，每组 20 只，雌雄各半。受试物设0.9、1.8、3.6g/kg BW 3 个剂量组（约相当于人体推荐量的25、50、100倍）。灌胃量为 4ml/kg BW，每日 1 次灌胃给予受试物，溶剂对照组灌胃等量玉米油，连续灌胃 30d，自由饮食，每周记录大鼠进食量2次及体重 1 次，连续观察 30 d。实验结束时取血测定各项指标。
1.2.1 一般情况观察 每天观察动物的外观、行为、毒性表现和死亡情况。每周称体重、进食量，计算每周食物利用率、总食物利用率、总进食量及总增重。
1.2.2 血液学检查 腹主动脉取血测定血红蛋白含量、红细胞计数及白细胞计数，白细胞分类等血液学指标。取血清测定天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）等生化指标。
1.2.3 大体观察及病理组织检查 解剖观察各主要脏器及胸、腹腔大体异常改变。剖解出全部动物的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、睾丸，称重并计算脏器系数。脏器采用 10% 甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE 染色，在光镜下进行组织学检查。
1.3 数据处理 数据用SPSS18.0软件包进行统计分析。
2 结 果
2.1 一般情况 在试验期间内，所有动物均未出现拒食现象，无明显中毒症状，活动和饮食情况正常。各组动物每周食物利用率、总食物利用率、体重和增重与对照组比较，差异均无统计学意义。
2.2 血液学测定结果 各剂量组与对照组比较，各项血液学指标均无显著性差异，见表1、表2。
2.4 脏器重量、脏/体比值：雌、雄性大鼠各剂量组心重、肝重、脾重、肾重、睾丸重及其脏/体比值，与对照组比较均无显著性差异。
2.5 组织病理学检查 大体检查心脏、肝脏、肾脏、胃及小肠、脾脏和性腺等器官肉眼未见病变，故选择高剂量组和对照组动物的肝脏、肾脏、胃及小肠、脾脏和性腺进行组织病理学检查。对照组与高剂量组大鼠的肝脏、肾脏、胃及小肠、脾脏和性腺组织病理学观察结果大致相同，未见与受试物有关的病理改变。
3 讨 论
鱼油中的ω-3型多烯脂肪酸（ω-3 PU FAs），尤其是EPA、DHA为人体所必需的脂肪酸，其降血脂功能已得到大量临床及实验研究的证实。本研究通过30 d 喂养实验，观察到雄性大鼠各剂量组甘油三酯与对照组比较差异虽无显著性意义，但有降低趋势。本研究未发现与鱼油有关的毒性作用的最大剂量，与曾强等[7]对深海鱼油的研究结果一致，即未发现鱼油的亚急性毒性。曾强等[7]对深海鱼油进行急性毒性和遗传毒性的研究，结果发现，深海鱼油对两种性别的大、小鼠经口急性毒性最大耐受量（MTD）均大于15.0 g / kg；Ames 试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠睾丸染色体畸变试验结果均为阴性，表明深海鱼油为无毒级，无遗传毒性，是一种安全的保健食品。尽管如此，但过量摄入也可能会带来某些不良的效果或副作用，有关其长期食用的安全性有待进一步研究，建议食用此类产品应适量控制。
参考文献
[1] 唐武能，邝声耀，唐凌，等.鱼油在饲料中的应用研究[J].四川畜牧兽医，2011（4）：31-33.
[2] 扶志敏，王正.ω-3 多不饱和脂肪酸抗炎机制研究进展[J].医药导报，2009，28（9）：1174-1176.
[3] 刘安军，朱晓芳，郑捷，等.鱿鱼肝脏鱼油成分及其体外抗氧化性的研究[J].现代食品科技，2010（1）：18-21.
[4] Young K.Omega-6（n-6）and omega-3（n-3）fatty acids in tilapia and human health：a review[J].Int J Food Sci Nutr，2009，60（Suppl 5）：203-211.
[5] Muldoon MF，Ryan CM，Sheu L，et al.Serum phospholipid docosa-hexaenonic acid is associated with cognitive functioning during middle a-dulthood[J].J Nutr，2010，140：848-853.
[6] 张云竹，柏 杨，刘小琴，等.海洋鱼油资源开发和应用研究进展[J].安徽农业科学，2012，40（28）：14005-14007.
[7] 曾强，张静姝，刘忠慧，等.深海鱼油毒理学安全性评价[J].职业与健康，2012，28（13）：1569-1571.