【摘 要】
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目的 探讨研究长链非编码RNA LINC00675对肝癌细胞生物学行为的影响及其分子机制.方法 通过qRT-PCR检测LINC00675在肝癌组织以及细胞中表达量,并检测LINC00675在肝癌细胞HepG3与Huh7细胞质及细胞核中的表达分布.通过在HepG3与Huh7中稳定转染慢病毒过表达LINC00675建立细胞模型.通过CCK-8与流式细胞学检测LINC00675对肝癌细胞增殖、凋亡行为的影响,并通过检测细胞模型中葡萄糖摄取量以及乳酸产量变化监测细胞Warburg效应的变化,运用带有AGO2抗体的
【机 构】
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右江民族医学院附属医院肝胆外科,广西百色533000;右江民族医学院基础学院生物化学教研室,广西百色533000
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目的 探讨研究长链非编码RNA LINC00675对肝癌细胞生物学行为的影响及其分子机制.方法 通过qRT-PCR检测LINC00675在肝癌组织以及细胞中表达量,并检测LINC00675在肝癌细胞HepG3与Huh7细胞质及细胞核中的表达分布.通过在HepG3与Huh7中稳定转染慢病毒过表达LINC00675建立细胞模型.通过CCK-8与流式细胞学检测LINC00675对肝癌细胞增殖、凋亡行为的影响,并通过检测细胞模型中葡萄糖摄取量以及乳酸产量变化监测细胞Warburg效应的变化,运用带有AGO2抗体的RNA免疫沉淀技术评估LINC00675与mRNA的潜在结合能力.使用LncBase Predicted v.2 DIANA工具预测LINC00675下游mRNA靶基因.运用RNA pull-down技术检测LINC00675与miR-665结合的可能性.运用荧光素酶实验验证LINC00675与miR-665的靶向结合,共转染实验验证miR-665介导了LINC00675对肝癌生物学行为的影响.通过使用JASPAR数据库预测LINC00675上游调控基因.通过构建NR2C2过表达以及敲低细胞模型,并使用qRT-PCR实验检测细胞模型中的LINC00675表达量的变化.运用荧光素酶实验验证LINC00675启动子与NR2C2的靶向结合位点.结果 LINC00675在肝癌细胞系中低表达,且主要表达于细胞质中.过表达LINC00675抑制肝癌细胞的增殖能力与Warburg效应,并促进肝癌细胞凋亡.NR2C2介导的LINC00675在肝癌细胞中靶向结合miR-665,负向调控miR-665的表达,并通过结合miR-665来调控肝癌细胞的生物学行为.结论 NR2C2介导的LINC00675通过靶向结合miR-665调控肝癌细胞的增殖和凋亡的生物学行为.
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