【摘 要】
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为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的蛋白结构和生理功能,利用RT-PCR和RACE方法,从金鱼肝胰脏中成功克隆获得了一种全长864 bp的胰蛋白酶原cD NA序列(gfT ryp)。gfT rypc DNA包含21
【基金项目】
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Supported by the National Natural Science Foundation of China(31101878);the Excellent Youth Foundation of Henan Polytechnic University(J2014-02);the Youth Backbone Teacher Foundation of Henan Polyte
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为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的蛋白结构和生理功能,利用RT-PCR和RACE方法,从金鱼肝胰脏中成功克隆获得了一种全长864 bp的胰蛋白酶原cD NA序列(gfT ryp)。gfT rypc DNA包含21 bp的5′-非翻译区、114 bp的3′-非翻译区和729 bp的开放读码框,编码242个氨基酸组成的胰蛋白酶原(gf Tryp)。gf Tryp含有15个氨基酸的信号肽和5个氨基酸(LDDDK)的激活肽。氨基酸序列分析表明,gf Tryp具备胰蛋白酶原的保守结构特征,如含有催化三联体氨基酸(His-57、Asp-102和Ser-195),12个半胱氨酸,位于底物结合口袋底部Asp-189和口袋开口处的Gly-216、Gly-226等,提示其可能具有保守的蛋白消化功能。RT-PCR结果显示,gf Tryp mRNA在所检测的各个组织中均有表达,其中在肝胰脏、肠和脂肪中表达量为最高。进一步研究发现,相较于摄食前,肝胰脏gf Tryp mRNA在金鱼摄食后显著升高。在0.5和5μg/m L镉暴露处理后,肝胰脏gf Tryp mRNA显著升高(与未处理组相比,分别约为3.2和4.7倍)。随着镉浓度增加到10μg/mL后,gfT ryp mR NA表达量下降。经100μmol/L过氧化氢处理3h、6h、12h和24h后,金鱼肝胰脏gf Tryp mRNA的表达水平均显著下降,在6h达到最大效应(约为对照组的0.21倍)。研究结果证实了重金属镉和过氧化氢处理能调控胰蛋白酶原基因表达,为进一步探讨鱼类消化生理提供了新的视角。
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