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[摘要]文章分析了癌痛平胶囊的最佳提取工艺。
[关键词]癌痛平胶囊生产工艺
中图分类号:R944.5 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2013)28-0315-01
复方癌痛平胶囊为治疗癌性疼痛的中药新制剂，由蚤休、荜茇和鼠妇等药物组成，具有解毒祛淤、化痰通络等功效。临床主要用于治疗各类癌性疼痛，总有效率为90%，疗效肯定，已为临床和药效学实验研究所证实。我们对原方采用醇提、水提等办法，力求保持了原剂型水煎的特色，并经精制除杂、在提取物中加适量辅料等工艺过程，精制成口服胶囊。具体实验内容分为两大部分：①乙醇提取工艺的研究；方中主药荜茇，具有温中散寒、下气止痛等功效。据相关文献报道，荜茇果实含胡椒碱，棕榈酸，四氢胡椒酸，挥发油等成分，其主要生理活性成分为胡椒碱。另据文献报道，荜茇中胡椒碱为生物碱类化合物，几不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸，因此我们选择乙醇对包括荜茇在内的几味药进行了提取预试，并应用高效液相色谱法对提取样品中的胡椒碱进行了测定。在确定胡椒碱转移率合理的基础上，进一步采用正交实验，优选最佳醇提取工艺。②水提取工艺的研究；方中君药蚤休（重楼），具有清热解毒，消肿止痛等功效。据相关文献报道，蚤休（重楼）主要药效成分为重楼总皂苷。另据文献报道，蚤休中重楼皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇和热甲醇，几不溶或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂，因此我们选择水对包括蚤休在内的几味药进行了提取预试，并应用紫外分光光度法对提取样品中的重楼总皂苷进行了测定。在确定重楼总皂苷转移率合理的基础上，进一步采用正交实验，优选最佳水提取工艺。
一、仪器与材料
1.仪器
美国Waters 515双泵/2487检测器高效液相色谱仪，Rheodyne进样器。色谱柱：反相C18柱Hedera ODS-2，编号C1806091411 （中国科学院大连化学物理研究所制）。754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。
2、药材
购于安徽省亳州市药材公司，经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定。荜茇为胡椒科植物Piper longum L.的干燥成熟果穗；蚤休（重楼）为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand.-Mazz.或七叶一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.) Hara的干燥根茎。
3、对照品胡椒碱购自中国药品生物制品检定所，批号为0775-200203，供含量测定用。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ购自中国药品生物制品检定所，批号分别为111590-200402、11591-200402，供含量测定用。
4、试剂甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水(自制)，其他试剂均为分析纯，购自南京鹏程化学玻璃仪器有限公司。
二、方法
1、醇提取工艺
为了优化制备工艺，根据醇提部分主要影响因素，确定实验因素和水平。
1） 胡椒碱转移率的测定色谱条件
流动相：甲醇-水（77:23），检测波长343 nm，流速1.0 ml•min-1，灵敏度1.0 AUFS，柱温30℃。
2）对照品溶液的制备
精密称取胡椒碱对照品，加无水乙醇制成每毫升含100 μg的溶液，即得。
3）荜茇药材溶液的制备
本品中粉0.25 g，精密称定，置于100 ml棕色容量瓶，加无水乙醇80 ml，超声30 min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过。
4）供试品溶液的制备
依照癌痛平胶囊方中醇提药味处方量，称取荜茇等药材160 g，共9份，得到9份乙醇提取液，静置，取上清液，离心15 min，转速12 000 r/min。吸取离心后的上清液1 ml，置于5 ml棕色容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，作为供试品溶液。
2、水提取工艺为了优化制备工艺，根据水提部分主要影响因素，确定实验因素和水平。
1） 重楼总皂苷转移率的测定对照品溶液的制备
精密称取重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ对照品，分别加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的溶液，即得。
2）蚤休药材溶液的制备
称取单味蚤休药材50 g，加21倍量水，一次煎煮3 h，测体积，留样。量取离心过的药材水提液40 ml，用水饱和的正丁醇液萃取3次，30 ml/次，收集正丁醇液，蒸干，用95%乙醇定容于25 ml量瓶中。精密吸取0.2 ml，置具塞试管中，烘干，加入5%香草醛冰醋酸和高氯酸1 ml(1:4)，摇匀，密塞，85℃水浴20 min，冰浴5 min后，加入5 ml冰醋酸。放置110 min后，于465 nm下测定吸光度。
3）阴性溶液的制备
称取除蚤休以外的其他各味药各50 g，加21倍量的水，一次煎煮3 h，测体积，留样。量取离心过的阴性水提液40 ml，按药材溶液制备方法同法制得，测定吸光度。
4）供试品溶液的制备
依照癌痛平胶囊方中水提药味处方量，称取蚤休等药材200 g，共9份，得到9份水提液，离心，静置，量取40 ml，按药材溶液制备方法同法制得，测定吸光度。
三、结果
1、从方差分析结果可知，A因素是显著性影响因素，B，C因素影响不是很明显，由直观分析可以看出，K3a＞K2a＞K1a,故因素A选择水平3，即乙醇浓度为70%；K3b＞K2b＞K1b,故因素B選择水平3，即乙醇用量为12倍，第1次加7倍量，第2次加5倍量；K3c＞K2c＞K1c,因素C选择水平3，即提取4 h,第1次2.0 h,第2次2.0 h。
综上所述，荜茇等几味药材乙醇提取的最佳工艺为A3B3C3，即药材加70%的乙醇回流提取两次，2 h/次，第1次加7倍量，第2次加5倍量，滤过，滤液合并。
2、从方差分析结果可知，B因素是显著性影响因素，A、C因素影响不是很明显，由直观分析可以看出，K3a＞K2a＞K1a,故因素A选择水平3，即加水量为21倍；K3b＞K2b＞K1b,故因素B选择水平3，即煎煮时间为4 h；K2c＞K3c＞K1c,因素C选择水平2，即煎煮2次。
综上所述，蚤休等几味药材水提取的最佳工艺为A3B3C2，即药材煎煮2次，2 h/次，第1次加11倍量，第2次加10倍量，滤过，滤液合并。
3、验证实验按照上述最佳乙醇提取工艺，平行3份，胡椒碱转移率分别为90.87%，91.32%，91.44%，有效成分提取较完全；按照上述最佳水提取工艺，平行3份，重楼总皂苷转移率分别为90.54%，90.60%，90.85%，有效成分提取较完全，说明本研究所确定的醇提和水提工艺合理、可行。
四、讨论
荜茇中胡椒碱为生物碱类化合物，几不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸。预实验中发现，以水作为溶剂，胡椒碱几乎不能提出。根据预试验和正交实验结果，确立了复方癌痛平胶囊中荜茇等主要药味的醇提工艺。
蚤休中重楼皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇和热甲醇，几不溶或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。预试验中发现，以水作为溶剂，重楼皂苷提取较完全。根据预试验和正交实验结果，确立了复方癌痛平胶囊中蚤休（重楼）等主要药味的水提工艺。
复方中水提取部分有一步骤为醇沉去杂，该醇沉工艺为水提取液浓缩至每毫升含1.5 g生药，醇沉至乙醇浓度为60%，静止18 h。
参考文献
［1］ 张裕强，朱华旭，郭立玮 ,复方癌痛平胶囊的提取工艺研究,论文网，2009，04.
[关键词]癌痛平胶囊生产工艺
中图分类号:R944.5 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2013)28-0315-01
复方癌痛平胶囊为治疗癌性疼痛的中药新制剂，由蚤休、荜茇和鼠妇等药物组成，具有解毒祛淤、化痰通络等功效。临床主要用于治疗各类癌性疼痛，总有效率为90%，疗效肯定，已为临床和药效学实验研究所证实。我们对原方采用醇提、水提等办法，力求保持了原剂型水煎的特色，并经精制除杂、在提取物中加适量辅料等工艺过程，精制成口服胶囊。具体实验内容分为两大部分：①乙醇提取工艺的研究；方中主药荜茇，具有温中散寒、下气止痛等功效。据相关文献报道，荜茇果实含胡椒碱，棕榈酸，四氢胡椒酸，挥发油等成分，其主要生理活性成分为胡椒碱。另据文献报道，荜茇中胡椒碱为生物碱类化合物，几不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸，因此我们选择乙醇对包括荜茇在内的几味药进行了提取预试，并应用高效液相色谱法对提取样品中的胡椒碱进行了测定。在确定胡椒碱转移率合理的基础上，进一步采用正交实验，优选最佳醇提取工艺。②水提取工艺的研究；方中君药蚤休（重楼），具有清热解毒，消肿止痛等功效。据相关文献报道，蚤休（重楼）主要药效成分为重楼总皂苷。另据文献报道，蚤休中重楼皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇和热甲醇，几不溶或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂，因此我们选择水对包括蚤休在内的几味药进行了提取预试，并应用紫外分光光度法对提取样品中的重楼总皂苷进行了测定。在确定重楼总皂苷转移率合理的基础上，进一步采用正交实验，优选最佳水提取工艺。
一、仪器与材料
1.仪器
美国Waters 515双泵/2487检测器高效液相色谱仪，Rheodyne进样器。色谱柱：反相C18柱Hedera ODS-2，编号C1806091411 （中国科学院大连化学物理研究所制）。754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。
2、药材
购于安徽省亳州市药材公司，经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定。荜茇为胡椒科植物Piper longum L.的干燥成熟果穗；蚤休（重楼）为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis(Franch.) Hand.-Mazz.或七叶一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.) Hara的干燥根茎。
3、对照品胡椒碱购自中国药品生物制品检定所，批号为0775-200203，供含量测定用。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ购自中国药品生物制品检定所，批号分别为111590-200402、11591-200402，供含量测定用。
4、试剂甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水(自制)，其他试剂均为分析纯，购自南京鹏程化学玻璃仪器有限公司。
二、方法
1、醇提取工艺
为了优化制备工艺，根据醇提部分主要影响因素，确定实验因素和水平。
1） 胡椒碱转移率的测定色谱条件
流动相：甲醇-水（77:23），检测波长343 nm，流速1.0 ml•min-1，灵敏度1.0 AUFS，柱温30℃。
2）对照品溶液的制备
精密称取胡椒碱对照品，加无水乙醇制成每毫升含100 μg的溶液，即得。
3）荜茇药材溶液的制备
本品中粉0.25 g，精密称定，置于100 ml棕色容量瓶，加无水乙醇80 ml，超声30 min，放置至室温后，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过。
4）供试品溶液的制备
依照癌痛平胶囊方中醇提药味处方量，称取荜茇等药材160 g，共9份，得到9份乙醇提取液，静置，取上清液，离心15 min，转速12 000 r/min。吸取离心后的上清液1 ml，置于5 ml棕色容量瓶中，用流动相溶解稀释至刻度，作为供试品溶液。
2、水提取工艺为了优化制备工艺，根据水提部分主要影响因素，确定实验因素和水平。
1） 重楼总皂苷转移率的测定对照品溶液的制备
精密称取重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ对照品，分别加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的溶液，即得。
2）蚤休药材溶液的制备
称取单味蚤休药材50 g，加21倍量水，一次煎煮3 h，测体积，留样。量取离心过的药材水提液40 ml，用水饱和的正丁醇液萃取3次，30 ml/次，收集正丁醇液，蒸干，用95%乙醇定容于25 ml量瓶中。精密吸取0.2 ml，置具塞试管中，烘干，加入5%香草醛冰醋酸和高氯酸1 ml(1:4)，摇匀，密塞，85℃水浴20 min，冰浴5 min后，加入5 ml冰醋酸。放置110 min后，于465 nm下测定吸光度。
3）阴性溶液的制备
称取除蚤休以外的其他各味药各50 g，加21倍量的水，一次煎煮3 h，测体积，留样。量取离心过的阴性水提液40 ml，按药材溶液制备方法同法制得，测定吸光度。
4）供试品溶液的制备
依照癌痛平胶囊方中水提药味处方量，称取蚤休等药材200 g，共9份，得到9份水提液，离心，静置，量取40 ml，按药材溶液制备方法同法制得，测定吸光度。
三、结果
1、从方差分析结果可知，A因素是显著性影响因素，B，C因素影响不是很明显，由直观分析可以看出，K3a＞K2a＞K1a,故因素A选择水平3，即乙醇浓度为70%；K3b＞K2b＞K1b,故因素B選择水平3，即乙醇用量为12倍，第1次加7倍量，第2次加5倍量；K3c＞K2c＞K1c,因素C选择水平3，即提取4 h,第1次2.0 h,第2次2.0 h。
综上所述，荜茇等几味药材乙醇提取的最佳工艺为A3B3C3，即药材加70%的乙醇回流提取两次，2 h/次，第1次加7倍量，第2次加5倍量，滤过，滤液合并。
2、从方差分析结果可知，B因素是显著性影响因素，A、C因素影响不是很明显，由直观分析可以看出，K3a＞K2a＞K1a,故因素A选择水平3，即加水量为21倍；K3b＞K2b＞K1b,故因素B选择水平3，即煎煮时间为4 h；K2c＞K3c＞K1c,因素C选择水平2，即煎煮2次。
综上所述，蚤休等几味药材水提取的最佳工艺为A3B3C2，即药材煎煮2次，2 h/次，第1次加11倍量，第2次加10倍量，滤过，滤液合并。
3、验证实验按照上述最佳乙醇提取工艺，平行3份，胡椒碱转移率分别为90.87%，91.32%，91.44%，有效成分提取较完全；按照上述最佳水提取工艺，平行3份，重楼总皂苷转移率分别为90.54%，90.60%，90.85%，有效成分提取较完全，说明本研究所确定的醇提和水提工艺合理、可行。
四、讨论
荜茇中胡椒碱为生物碱类化合物，几不溶于水或石油醚，易溶于氯仿、乙醇或乙醚，可溶于苯或醋酸。预实验中发现，以水作为溶剂，胡椒碱几乎不能提出。根据预试验和正交实验结果，确立了复方癌痛平胶囊中荜茇等主要药味的醇提工艺。
蚤休中重楼皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇和热甲醇，几不溶或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。预试验中发现，以水作为溶剂，重楼皂苷提取较完全。根据预试验和正交实验结果，确立了复方癌痛平胶囊中蚤休（重楼）等主要药味的水提工艺。
复方中水提取部分有一步骤为醇沉去杂，该醇沉工艺为水提取液浓缩至每毫升含1.5 g生药，醇沉至乙醇浓度为60%，静止18 h。
参考文献
［1］ 张裕强，朱华旭，郭立玮 ,复方癌痛平胶囊的提取工艺研究,论文网，2009，04.