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【摘要】目的建立葡萄酒中日落黄与胭脂红两种色素的液相色谱测定新方法。方法将样品中的乙醇除去，并通过水提与过滤后，采用岛津公司的C18色谱柱将其分离。流动相为甲酸-乙酸铵，洗脱方式为梯度洗脱，流速设定为1.0mlmin，检测器为紫外检测器，柱温为32℃，检测波长为500nm。结果日落黄与胭脂红在1.0-50.0ugml范围内其线性良好，线性相关系数均为0.9999，线性方程为日落黄：y=59.032x-8.6513，胭脂紅：y=44.733x-6.452。以SN=3作为信噪比可得，日落黄的检出限为0.20mgkg，胭脂红的检出限为0.25mgkg。本文两种色素的检测RS分别为日落黄2.2%，胭脂红1.5%，回收率为92.0%-98.8%，符合相关要求。结论采用该方法对葡萄酒中的色素进行测定，具有灵敏度高、操作简便、准确性高、分离能力好等优点，值得进行推广与应用。
【关键词】液相色谱法；葡萄酒；日落黄；胭脂红
doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.758文章编号：1004-7484（2013-10-6195-01
日落黄与胭脂红是人工合成的可食用色素，常被添加至各类饮品中以提高其色泽的鲜艳度与观赏性。由于人工合成色素多用煤焦油作为原料制备而成，且制备工艺与水平参差不齐，导致其安全性普遍较差[1]。人工合成色素中的苯环、蒽环等对于人体具有毒害作用，长期使用会严重影响消费者的健康，因此我国对于人工合成色素的用量有严格的限制。葡萄酒中日落黄与胭脂红的使用较为常见，对于含乙醇的饮品中日落黄与胭脂红的含量测定主要采用液相色谱法[2]。本文通过液相色谱法对葡萄酒中的这两种色素进行测定，具备准确、高效、灵敏、简便等优点，最终取得了满意的结果。
1资料与方法
1.1仪器与试剂本文所用高效液相色谱仪为岛津公司生产的LC-20AT系列高效液相色谱仪，BT224s电子天平（德国赛多利斯公司，NeXpower1000超纯水仪（韩国公司，日落黄（中科院：GBW（E100003a，胭脂红（中科院：GBW（E100004a，甲醇（中国天津市康科德公司为色谱纯，乙酸铵（中国天津市科密欧公司为分析纯，水为超纯水。
1.2色谱条件与标液的配制本文色谱柱为岛津公司生产的C18柱（5um，150×4.6mm，流动相为甲醇-乙酸铵（0.02molL，流速为1.0mlmin，柱温为32℃，检测波长为509nm，洗脱方式如下：
标准溶液的配制方法为：准确称取日落黄与胭脂红各0.1000g，采用超纯水溶解，定容至100ml，获得1.0mgml的标准溶液。工作溶液为取上述标液进行稀释，获得1ugml、5ugml、10ugml、20ugml以及50ugml的工作液。
1.3样品的前处理与测定准确称取样品5.00g，置于50ml烧杯中加热以除去乙醇，将其转移至25ml容量瓶中定容，过0.45um水系滤膜后，常规注入进样瓶中准备进样。根据保留时间定性，峰面积定量，定量方法采用外标法。
2结果
2.1线性与检出限通过对混标工作液进行测试可得，在1.00-50.0uml范围内，日落黄与胭脂红的线性关系良好，日落黄回归方程为y=59.032x-8.6513，线性相关系数为0.9999，胭脂红的回归方程为y=44.733x-6.452，线性相关系数为0.9999。以信噪比为SN=3计算检出限可得，日落黄的检出限为0.20mgkg，胭脂红的检出限为0.25mgkg。
2.2精密度与回收率取6份葡萄酒样品，加入st1进行上机检测可得，6次进样结果的精密度分别为日落黄2.2%，胭脂红1.5%，符合相关要求。选取高（st5、中（st3、低（st1三种浓度进行加样回收可得，回收率为92.0%-98.8%，见表2。
3讨论
3.1前处理方法的选择本文选用水作为提取溶剂，其原因在于日落黄与胭脂红均为水溶性色素，因此采用水提取即可获得较高回收率。有研究显示采取聚酰胺吸附法进行提取能够获得更好的回收率，且基质干扰较小[3]，但本文认为葡萄酒中所含基质较少，对于色谱柱的影响较小，因此采用一步提取法即可达到满意的结果。
3.2色谱条件的优化本文检测的两种色素：日落黄与胭脂红均属于水溶性色素，具有较强的极性，因此在选择色谱柱时采用反相色谱柱，以达到较好的分离效果[4]。在选择流动相时，本文最初选择了3对流动相：甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙酸铵，通过平行操作后，最终获得甲醇-乙酸铵作为流动相的分离效果最佳。检测波长最初设定为483nm，因为日落黄在481、483、486nm处均有最大吸收，但由于胭脂红在509nm处的吸收较大，因此选择509nm能够完全满足日落黄与胭脂红均具有较大吸收。
3.3光谱优化本文所采用的紫外检测器理论上可以采集波长为190-700nm的光谱图，对于色谱峰的定性具有可靠性，且能够有效避免单纯凭借保留时间对待测物质进行定性的不准确性。本文选择509nm的目的在于避开254nm以下波长，降低杂质的干扰，使得待测物质在低浓度的情况下仍能够获得良好匹配度。
4小结
本文认为该方法采用一步提取法对样品进行前处理，能够达到操作简便、处理快速的优点。利用梯度洗脱的方式能够使得检测方法灵敏度更高，受杂质干扰更小。采用本法对葡萄酒中的色素进行分析，能够使色谱峰良好分离，结果准确性高、可靠性佳、分析速度快。因此对于葡萄酒中的色素分析可以采用该方法，对于其他液体食品中人工合成色素的测定，该方法也具有一定的指导意义
参考文献
[1]谷岩，曲明.高效液相色谱法测定饮料的食用色素[J].化学分析量，2004，13（1：42-43.
[2]欧阳燕玲，谢唯平，陈春祝.高效液相色谱法检测葡萄酒中5种人工合成色素的方法探讨[J].中国卫生检验杂志，2005，15（10：1218-1220.
[3]傒星林，邵仕萍.高效液相色谱检测食品中日落黄色素[J].食品安全质量检测技术试刊论文集，2008：15-19.
[4]Bi H，Hoffman KL，Pace G，et al.ixed-mechanism ionization to enhance sensitivity in atomospheric pressure ionization LCS[J].J Pharm Biomed Anal，2000，22（5：861.
【关键词】液相色谱法；葡萄酒；日落黄；胭脂红
doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.758文章编号：1004-7484（2013-10-6195-01
日落黄与胭脂红是人工合成的可食用色素，常被添加至各类饮品中以提高其色泽的鲜艳度与观赏性。由于人工合成色素多用煤焦油作为原料制备而成，且制备工艺与水平参差不齐，导致其安全性普遍较差[1]。人工合成色素中的苯环、蒽环等对于人体具有毒害作用，长期使用会严重影响消费者的健康，因此我国对于人工合成色素的用量有严格的限制。葡萄酒中日落黄与胭脂红的使用较为常见，对于含乙醇的饮品中日落黄与胭脂红的含量测定主要采用液相色谱法[2]。本文通过液相色谱法对葡萄酒中的这两种色素进行测定，具备准确、高效、灵敏、简便等优点，最终取得了满意的结果。
1资料与方法
1.1仪器与试剂本文所用高效液相色谱仪为岛津公司生产的LC-20AT系列高效液相色谱仪，BT224s电子天平（德国赛多利斯公司，NeXpower1000超纯水仪（韩国公司，日落黄（中科院：GBW（E100003a，胭脂红（中科院：GBW（E100004a，甲醇（中国天津市康科德公司为色谱纯，乙酸铵（中国天津市科密欧公司为分析纯，水为超纯水。
1.2色谱条件与标液的配制本文色谱柱为岛津公司生产的C18柱（5um，150×4.6mm，流动相为甲醇-乙酸铵（0.02molL，流速为1.0mlmin，柱温为32℃，检测波长为509nm，洗脱方式如下：
标准溶液的配制方法为：准确称取日落黄与胭脂红各0.1000g，采用超纯水溶解，定容至100ml，获得1.0mgml的标准溶液。工作溶液为取上述标液进行稀释，获得1ugml、5ugml、10ugml、20ugml以及50ugml的工作液。
1.3样品的前处理与测定准确称取样品5.00g，置于50ml烧杯中加热以除去乙醇，将其转移至25ml容量瓶中定容，过0.45um水系滤膜后，常规注入进样瓶中准备进样。根据保留时间定性，峰面积定量，定量方法采用外标法。
2结果
2.1线性与检出限通过对混标工作液进行测试可得，在1.00-50.0uml范围内，日落黄与胭脂红的线性关系良好，日落黄回归方程为y=59.032x-8.6513，线性相关系数为0.9999，胭脂红的回归方程为y=44.733x-6.452，线性相关系数为0.9999。以信噪比为SN=3计算检出限可得，日落黄的检出限为0.20mgkg，胭脂红的检出限为0.25mgkg。
2.2精密度与回收率取6份葡萄酒样品，加入st1进行上机检测可得，6次进样结果的精密度分别为日落黄2.2%，胭脂红1.5%，符合相关要求。选取高（st5、中（st3、低（st1三种浓度进行加样回收可得，回收率为92.0%-98.8%，见表2。
3讨论
3.1前处理方法的选择本文选用水作为提取溶剂，其原因在于日落黄与胭脂红均为水溶性色素，因此采用水提取即可获得较高回收率。有研究显示采取聚酰胺吸附法进行提取能够获得更好的回收率，且基质干扰较小[3]，但本文认为葡萄酒中所含基质较少，对于色谱柱的影响较小，因此采用一步提取法即可达到满意的结果。
3.2色谱条件的优化本文检测的两种色素：日落黄与胭脂红均属于水溶性色素，具有较强的极性，因此在选择色谱柱时采用反相色谱柱，以达到较好的分离效果[4]。在选择流动相时，本文最初选择了3对流动相：甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙酸铵，通过平行操作后，最终获得甲醇-乙酸铵作为流动相的分离效果最佳。检测波长最初设定为483nm，因为日落黄在481、483、486nm处均有最大吸收，但由于胭脂红在509nm处的吸收较大，因此选择509nm能够完全满足日落黄与胭脂红均具有较大吸收。
3.3光谱优化本文所采用的紫外检测器理论上可以采集波长为190-700nm的光谱图，对于色谱峰的定性具有可靠性，且能够有效避免单纯凭借保留时间对待测物质进行定性的不准确性。本文选择509nm的目的在于避开254nm以下波长，降低杂质的干扰，使得待测物质在低浓度的情况下仍能够获得良好匹配度。
4小结
本文认为该方法采用一步提取法对样品进行前处理，能够达到操作简便、处理快速的优点。利用梯度洗脱的方式能够使得检测方法灵敏度更高，受杂质干扰更小。采用本法对葡萄酒中的色素进行分析，能够使色谱峰良好分离，结果准确性高、可靠性佳、分析速度快。因此对于葡萄酒中的色素分析可以采用该方法，对于其他液体食品中人工合成色素的测定，该方法也具有一定的指导意义
参考文献
[1]谷岩，曲明.高效液相色谱法测定饮料的食用色素[J].化学分析量，2004，13（1：42-43.
[2]欧阳燕玲，谢唯平，陈春祝.高效液相色谱法检测葡萄酒中5种人工合成色素的方法探讨[J].中国卫生检验杂志，2005，15（10：1218-1220.
[3]傒星林，邵仕萍.高效液相色谱检测食品中日落黄色素[J].食品安全质量检测技术试刊论文集，2008：15-19.
[4]Bi H，Hoffman KL，Pace G，et al.ixed-mechanism ionization to enhance sensitivity in atomospheric pressure ionization LCS[J].J Pharm Biomed Anal，2000，22（5：861.