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中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）02-0221-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.02.16
摘 要 目的：建立同时测定蒙药森登-4汤散中7种抗风湿活性成分儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素含量的方法。方法：采用高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD）。色谱柱为Sil Green C18，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱），流速为1 mL/min，检测波长为238 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。结果：儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素检测质量浓度的线性范围分别为8.590～2 290、10.56～3 901、13.00～3 958、8.815～564.2、4.030～257.8、8.130～750.5、7.075～454.2 μg/mL（r≥0.999 1 ）；检测限分别为0.429 5、0.264 0、0.325 0、0.220 4、0.201 5、0.203 2、0.176 9 μg/mL，定量限分别为 1.030、1.321、1.302、1.397、1.637、0.813 0、0.707 5 μg/mL；精密度、稳定性（48 h）、重复性试验的RSD均小于2.0%（n=6）；平均加样回收率分别为96.24%～99.28%，RSD分别为1.03%～1.63%（n=6）。结论：该方法简便、准确、重复性良好，可用于同时测定蒙药森登-4汤散中儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素的含量。
關键词 森登-4汤散；高效液相色谱-二极管阵列检测法；儿茶素；二氢杨梅素；花旗松素；栀子苷；芦丁；杨梅素；槲皮素；含量
ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of 7 kinds of anti-rheumatic active ingredients in Mongolian medicine Sendeng-4 decoction powder， such as catechin， jasminoidin， dihydromyricetin， texifolin， rutin， myricetin and quercetin. METHODS： HPLC-DAD method was adopted. The determination was performed on Sil Green C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （gradient elution） at the flow rate of 1 mL/min. The detection wavelength was set at 238 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. RESULTS： The linear range of catechin， jasminoidin， dihydromyricetin， texifolin， rutin， myricetin and quercetin were 8.590-2 290， 10.56-3 901， 13.00-3 958， 8.815-564.2， 4.030-257.8， 8.130-750.5， 7.075-454.2 μg/mL （r≥0.999 1）， respectively； the limits of detection were 0.429 5， 0.264 0， 0.325 0， 0.220 4， 0.201 5， 0.203 2， 0.176 9 μg/mL， respectively； the limits of quantification were 1.030， 1.321， 1.302， 1.397， 1.637， 0.813 0， 0.707 5 μg/mL， respectively. RSDs of precision， stability （48 h） and repetition tests were all lower than 2.0% （n=6）. The average recoveries were 96.24%-99.28% （RSD=1.03%-1.63%， n=6）. CONCLUSIONS： The established method is simple， accurate and reproducible， and can be used for simultaneous determination of catechin， jasminoidin， dihydromyricetin， texifolin， rutin， myricetin and quercetin in Mongolian medicine Sendeng-4 decoction powder.
KEYWORDS Sendeng-4 decoction powder； HPLC-DAD； Catechin； Dihydromyricetin； Texifolin； Jasminoidin； Rutin； Myricetin； Quercetin； Content
蒙药森登-4汤散是蒙医临床常用的抗风湿成药，于1881年收录于蒙医学家吉格木德丹金扎木苏著作《观者之喜》[1]，并收载于《传统蒙药与方剂》[2]。该药由4味药组成，其中文冠木15 g，川楝子9 g，栀子3 g，诃子3 g；具有清热、燥黄水的功效，用于治疗痛风、关节炎、水肿等病症。近年来对森登-4汤散的化学成分、药理及毒理作用、含量测定、煎煮及提取工艺、指标成分的药动学、谱效关系、抗风湿作用机制的代谢组学、配伍机制等方面的研究已有报道[3-8]。为了进一步阐明森登-4汤散药效物质基础及其抗风湿作用机制及组方原理，内蒙古民族大学许良课题组研究建立了同时测定[9]森登-4汤散中儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素7种活性成分的高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD）。 1 材料
1.1 仪器
600型高效液相色谱仪，配有2996型光电二极管检测器、717型自动进样器、600型四元泵（美国Waters公司）；AB-135S型电子天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；HH-S26S型数显恒温水浴锅（常州市金坛大地自动化仪器厂）；KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；2B型玻璃仪器气流烘干器（山东华鲁电热仪器有限公司）；SHZ-CB型循环水式多用真空泵（巩义市予华仪器有限責任公司）；B-220型恒温水浴锅、RE-52CS型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。
1.2 药材、药品与试剂
4种蒙药材文冠木（批号：20150812）、诃子（批号：20161002）、栀子（批号：20151101）、川楝子（批号：20160108）均购自通辽市北方药材市场，由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室苏日塔拉图副主任蒙药师鉴定，其中文冠木药材为无患子科植物文冠木（Xanthoceras sorbifolia Bunge.）的干燥茎干；川楝子药材为楝科植物川楝（MeLia toosendan Sieb.et Zucc.）的干燥成熟果实；栀子药材为茜草科植物栀子（Gardenia jasminoides Ellis.）的成熟果实；诃子药材为使君子科植物诃子（Terminalia chebula Retz.）的成熟果实。按文冠木15 g、川楝子9 g、栀子3 g、诃子3 g的处方比例，制成粗粉，过筛，混匀，即得6批样品（批号分别为20160115、20160130、20160215、20160228、20160302、20160510）。
花旗松素对照品（批号：A0082，纯度：99.2%）由成都曼思特生物科技有限公司提供；槲皮素对照品（批号：110081-200907，纯度：98.6%）、栀子苷对照品（批号：110749-200511，纯度：98%）、儿茶素对照品（批号：110877-201203，纯度：98.5%） 、芦丁对照品（批号：00809705，纯度：99%）均由中国食品药品检定研究院提供；杨梅素对照品（批号：100504，纯度：>98%）、二氢杨梅素对照品（批号：101206，纯度：98.9%）均购自上海融禾医药科技发展有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Sil Green C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m ）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～4 min，8%A→9%A；4～13 min，9%A→10%A；13～33 min，10%A→14%A；33～45 min，14%A→16%A；45～48 min，16%A→20%A ；48～70 min，20%A→21%A；70～80 min，21%A→30%A ；80～90 min，30%A→32%A；90～100 min，32%A→100%A；100～105 min，100%A；105～106 min，100%A→8%A ；106～110 min，8%A ）；流速：1 mL/min；检测波长：238 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品及混合对照品溶液 精密称取对照品杨梅素1.876 5 mg、儿茶素1.792 5 mg、槲皮素1.690 0 mg、 花旗松素3.257 5 mg、二氢杨梅素2.725 0 mg、 栀子苷1.077 5 mg、芦丁1.327 5 mg，分别置于5 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得单一对照品溶液。精密称取单一对照品杨梅素3.753 mg、儿茶素11.45 mg、 槲皮素2.271 mg、花旗松素2.821 mg、二氢杨梅素19.79 mg、栀子苷19.50 mg、芦丁1.289 mg，置于同一5 mL量瓶中，以甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液。根据所需将混合对照品溶液用甲醇稀释不同的倍数，即得到7种浓度的混合对照品溶液。
7种混合对照品溶液中，杨梅素质量浓度分别为0.008 130、0.032 50、0.130 0、0.260 0、0.404 5、0.509 9、0.750 5 mg/mL；儿茶素质量浓度分别为0.008 590、0.034 44、0.137 5、0.275 0、1.038、1.600、2.290 mg/mL；栀子苷质量浓度分别为0.010 56、0.042 25、0.169 0、0.338 0、0.975 1、1.950、3.901 mg/mL；二氢杨梅素质量浓度分别为0.013 00、0.052 00、0.104 0、0.416 0、0.989 5、1.980、3.958 mg/mL；花旗松素质量浓度分别为0.008 815、0.017 63、0.035 26、0.070 53、0.141 1、0.282 1、0.564 2 mg/mL；芦丁质量浓度分别为0.004 03、0.008 060、 0.016 11、0.032 23、0.064 45、0.128 9、0.257 8 mg/mL；杨梅素质量浓度分别为0.008 130、0.032 50、0.130 0、0.260 0、0.404 5、0.509 9、0.750 5 mg/mL；槲皮素质量浓度分别为0.007 075、0.014 19、0.028 39、0.056 78、0.113 6、0.227 1、0.454 2 mg/mL。以上溶液均于4 ℃冷藏、备用。
2.2.2 供试品溶液 精密称取森登-4样品1.000 0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入95%乙醇10 mL，称定质量，超声（功率：300 W，频率：50 kHz）2次，每次20 min，放冷，再称定质量，用95%乙醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 ?m微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液。
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.02.16
摘 要 目的：建立同时测定蒙药森登-4汤散中7种抗风湿活性成分儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素含量的方法。方法：采用高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD）。色谱柱为Sil Green C18，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱），流速为1 mL/min，检测波长为238 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。结果：儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素检测质量浓度的线性范围分别为8.590～2 290、10.56～3 901、13.00～3 958、8.815～564.2、4.030～257.8、8.130～750.5、7.075～454.2 μg/mL（r≥0.999 1 ）；检测限分别为0.429 5、0.264 0、0.325 0、0.220 4、0.201 5、0.203 2、0.176 9 μg/mL，定量限分别为 1.030、1.321、1.302、1.397、1.637、0.813 0、0.707 5 μg/mL；精密度、稳定性（48 h）、重复性试验的RSD均小于2.0%（n=6）；平均加样回收率分别为96.24%～99.28%，RSD分别为1.03%～1.63%（n=6）。结论：该方法简便、准确、重复性良好，可用于同时测定蒙药森登-4汤散中儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素的含量。
關键词 森登-4汤散；高效液相色谱-二极管阵列检测法；儿茶素；二氢杨梅素；花旗松素；栀子苷；芦丁；杨梅素；槲皮素；含量
ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of 7 kinds of anti-rheumatic active ingredients in Mongolian medicine Sendeng-4 decoction powder， such as catechin， jasminoidin， dihydromyricetin， texifolin， rutin， myricetin and quercetin. METHODS： HPLC-DAD method was adopted. The determination was performed on Sil Green C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （gradient elution） at the flow rate of 1 mL/min. The detection wavelength was set at 238 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. RESULTS： The linear range of catechin， jasminoidin， dihydromyricetin， texifolin， rutin， myricetin and quercetin were 8.590-2 290， 10.56-3 901， 13.00-3 958， 8.815-564.2， 4.030-257.8， 8.130-750.5， 7.075-454.2 μg/mL （r≥0.999 1）， respectively； the limits of detection were 0.429 5， 0.264 0， 0.325 0， 0.220 4， 0.201 5， 0.203 2， 0.176 9 μg/mL， respectively； the limits of quantification were 1.030， 1.321， 1.302， 1.397， 1.637， 0.813 0， 0.707 5 μg/mL， respectively. RSDs of precision， stability （48 h） and repetition tests were all lower than 2.0% （n=6）. The average recoveries were 96.24%-99.28% （RSD=1.03%-1.63%， n=6）. CONCLUSIONS： The established method is simple， accurate and reproducible， and can be used for simultaneous determination of catechin， jasminoidin， dihydromyricetin， texifolin， rutin， myricetin and quercetin in Mongolian medicine Sendeng-4 decoction powder.
KEYWORDS Sendeng-4 decoction powder； HPLC-DAD； Catechin； Dihydromyricetin； Texifolin； Jasminoidin； Rutin； Myricetin； Quercetin； Content
蒙药森登-4汤散是蒙医临床常用的抗风湿成药，于1881年收录于蒙医学家吉格木德丹金扎木苏著作《观者之喜》[1]，并收载于《传统蒙药与方剂》[2]。该药由4味药组成，其中文冠木15 g，川楝子9 g，栀子3 g，诃子3 g；具有清热、燥黄水的功效，用于治疗痛风、关节炎、水肿等病症。近年来对森登-4汤散的化学成分、药理及毒理作用、含量测定、煎煮及提取工艺、指标成分的药动学、谱效关系、抗风湿作用机制的代谢组学、配伍机制等方面的研究已有报道[3-8]。为了进一步阐明森登-4汤散药效物质基础及其抗风湿作用机制及组方原理，内蒙古民族大学许良课题组研究建立了同时测定[9]森登-4汤散中儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素7种活性成分的高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD）。 1 材料
1.1 仪器
600型高效液相色谱仪，配有2996型光电二极管检测器、717型自动进样器、600型四元泵（美国Waters公司）；AB-135S型电子天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；HH-S26S型数显恒温水浴锅（常州市金坛大地自动化仪器厂）；KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；2B型玻璃仪器气流烘干器（山东华鲁电热仪器有限公司）；SHZ-CB型循环水式多用真空泵（巩义市予华仪器有限責任公司）；B-220型恒温水浴锅、RE-52CS型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。
1.2 药材、药品与试剂
4种蒙药材文冠木（批号：20150812）、诃子（批号：20161002）、栀子（批号：20151101）、川楝子（批号：20160108）均购自通辽市北方药材市场，由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室苏日塔拉图副主任蒙药师鉴定，其中文冠木药材为无患子科植物文冠木（Xanthoceras sorbifolia Bunge.）的干燥茎干；川楝子药材为楝科植物川楝（MeLia toosendan Sieb.et Zucc.）的干燥成熟果实；栀子药材为茜草科植物栀子（Gardenia jasminoides Ellis.）的成熟果实；诃子药材为使君子科植物诃子（Terminalia chebula Retz.）的成熟果实。按文冠木15 g、川楝子9 g、栀子3 g、诃子3 g的处方比例，制成粗粉，过筛，混匀，即得6批样品（批号分别为20160115、20160130、20160215、20160228、20160302、20160510）。
花旗松素对照品（批号：A0082，纯度：99.2%）由成都曼思特生物科技有限公司提供；槲皮素对照品（批号：110081-200907，纯度：98.6%）、栀子苷对照品（批号：110749-200511，纯度：98%）、儿茶素对照品（批号：110877-201203，纯度：98.5%） 、芦丁对照品（批号：00809705，纯度：99%）均由中国食品药品检定研究院提供；杨梅素对照品（批号：100504，纯度：>98%）、二氢杨梅素对照品（批号：101206，纯度：98.9%）均购自上海融禾医药科技发展有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Sil Green C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m ）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～4 min，8%A→9%A；4～13 min，9%A→10%A；13～33 min，10%A→14%A；33～45 min，14%A→16%A；45～48 min，16%A→20%A ；48～70 min，20%A→21%A；70～80 min，21%A→30%A ；80～90 min，30%A→32%A；90～100 min，32%A→100%A；100～105 min，100%A；105～106 min，100%A→8%A ；106～110 min，8%A ）；流速：1 mL/min；检测波长：238 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品及混合对照品溶液 精密称取对照品杨梅素1.876 5 mg、儿茶素1.792 5 mg、槲皮素1.690 0 mg、 花旗松素3.257 5 mg、二氢杨梅素2.725 0 mg、 栀子苷1.077 5 mg、芦丁1.327 5 mg，分别置于5 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得单一对照品溶液。精密称取单一对照品杨梅素3.753 mg、儿茶素11.45 mg、 槲皮素2.271 mg、花旗松素2.821 mg、二氢杨梅素19.79 mg、栀子苷19.50 mg、芦丁1.289 mg，置于同一5 mL量瓶中，以甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液。根据所需将混合对照品溶液用甲醇稀释不同的倍数，即得到7种浓度的混合对照品溶液。
7种混合对照品溶液中，杨梅素质量浓度分别为0.008 130、0.032 50、0.130 0、0.260 0、0.404 5、0.509 9、0.750 5 mg/mL；儿茶素质量浓度分别为0.008 590、0.034 44、0.137 5、0.275 0、1.038、1.600、2.290 mg/mL；栀子苷质量浓度分别为0.010 56、0.042 25、0.169 0、0.338 0、0.975 1、1.950、3.901 mg/mL；二氢杨梅素质量浓度分别为0.013 00、0.052 00、0.104 0、0.416 0、0.989 5、1.980、3.958 mg/mL；花旗松素质量浓度分别为0.008 815、0.017 63、0.035 26、0.070 53、0.141 1、0.282 1、0.564 2 mg/mL；芦丁质量浓度分别为0.004 03、0.008 060、 0.016 11、0.032 23、0.064 45、0.128 9、0.257 8 mg/mL；杨梅素质量浓度分别为0.008 130、0.032 50、0.130 0、0.260 0、0.404 5、0.509 9、0.750 5 mg/mL；槲皮素质量浓度分别为0.007 075、0.014 19、0.028 39、0.056 78、0.113 6、0.227 1、0.454 2 mg/mL。以上溶液均于4 ℃冷藏、备用。
2.2.2 供试品溶液 精密称取森登-4样品1.000 0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入95%乙醇10 mL，称定质量，超声（功率：300 W，频率：50 kHz）2次，每次20 min，放冷，再称定质量，用95%乙醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 ?m微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液。