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摘要 目的：建立测定面制食品中十二烷基苯磺酸钠的方法。方法：采用高效液相色谱联合荧光检测器测定面制食品中线性十二烷基苯磺酸钠的含量，色谱柱：Synergi polar-RP （250mm×4.6mm，4?m）；流动相：甲醇+乙酸铵溶液=75+25（v/v）；流速：1.0ml·min-1；柱温：室温；进样量：10μL；Gain（增益）：1；激发波长：EX=230nm；发射波长：EM=290nm。结果：线性十二烷基苯磺酸钠在浓度为0.2～10.0μg/mL范围内呈良好的线性关系，r=1.0000；平均回收率为94.3%（n=9），RSD=1.2%。结论：所建立高效液相色谱-荧光检测器法操作简便，结果准确，重复性好，可用于检测各种面制食品中的十二烷基苯磺酸钠含量。
关键词：面制食品；十二烷基苯磺酸钠；高效液相色谱-荧光检测器
中图分类号： R155 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2015）04（a）-0000-00
非法添加洗衣粉之所以能让湿面团发泡，是其主要成分阴离子表面活性剂-十二烷基苯磺酸钠在起作用。表面活性剂有很强的起泡能力，经常被用作发泡剂。而市场上洗衣粉中的阴离子型表面活性剂均以十二烷基苯磺酸钠为主。
我国目前还没有检测食品或食品添加剂中十二烷基苯磺酸钠的国家标准或行业标准，更没有专门检测面制食品中十二烷基苯磺酸钠的标准。甘肃省食品质量监督检验中心检测是参照国家标准《水质阴离子表面活性剂的测定 亚甲蓝分光光度法》和新出台的甘肃省地方标准《面制品中十二烷基苯磺酸钠含量测定方法 亚甲蓝分光光度法》进行的测定。但有文献显示，用该方法测定十二烷基苯磺酸钠，当存在糖精钠、香兰素时会干扰测定结果，产生假阳性。而很多面制食品中多含有食品添加剂糖精钠和香兰素成分。进一步实验发现，用亚甲蓝分光光度法对十二烷基苯磺酸钠和糖精钠进行前处理获得的亚甲蓝衍生液，都显示光吸收阳性，不易区分开来。导致检测结果不准确，容易引起误判。
十二烷基苯磺酸钠具有肝毒性，过量摄入十二烷基苯磺酸钠对人体皮肤、肝脏有损害作用，一旦进入体内，肝脏线粒体会受到影响，血清中钙离子浓度下降，机体出现酸中毒，严重损害人民群众身体健康。
十二烷基苯磺酸钠含有一个芳香环，具有共轭双键，当吸收紫外光后，非定域π电子受到激发，由基态跃迁到第一电子激发态，当受激发电子很快返回基态时发出荧光，故可采用高灵敏度、高选择性的荧光检测器测定，同时，由于HPLC选用具有高效分离能力的色谱柱，使方法的选择性更好。
1、收集典型样品
为确保线性十二烷基笨磺酸钠测定标准的广泛使用性，大量收集了具有代表性的面制食品：馒头、花卷、蛋糕、面包、油条、麻花等种类的样品。
2、试样制备
2.1 试料制备
取试样适量（油炸类、烤制类除去外皮），切成薄片，置电热恒温干燥箱中，80℃烘干，研细备用。
2.2 供试液的制备
视十二烷基笨磺酸钠含量而定，称取试料细粉0.1～1.0g（准确至0.001g），置100mL容量瓶中，加50%乙醇溶液（v/v）适量，再加乙酸锌溶液（1mol/L）1.0mL和亚铁氰化钾溶液（10.6%）1.0mL，超声处理（功率250W，频率33kHz）10min，取出，置恒温水浴振荡器中，于50℃恒温震荡45min，取出，放冷。加50%乙醇溶液（v/v）定容至刻度，混匀。
3 仪器分析条件
通过大量查询文献确定了激发波长和发射波长；经过对流动相、色谱柱、等各种液相色谱条件的试验，得到以下最佳液相色谱条件：
a）色谱柱：Synergi polar-RP（极性端基封尾的醚连接苯基相键合硅胶为填充剂），250×4.6mm，4μm；
b） 流动相：甲醇+乙酸铵溶液（100mmol/L，冰乙酸调节pH至3.4）=75+25（v/v） ；
c） 流速：1.0mL/min；
d） 柱温：室温；
e） 进样量：10μL；
f） gain（增益）：1；
g） 激发波长：EX=230nm； 发射波长：EM=290nm。
5 线性范围
取浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL分别进行HPLC测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算标准曲线线性方程：
6 方法检出限（LOD）
根据GB/T 5009.1-2003（附录A中A.2.1 ）计算：
最低检出限为0.5mg/kg。
方法检出限
7 方法的定量限（LQD）
根据检出限算出方法的定量限（S/N=10），根据实验室内和实验室间验证结果，方法的定量限为：0.2μg/mL。
8 方法的准确度和精密度
8.1 准确度
按照上述方法，选择已知含量的自制试料，分别加入三个水平的线性十二烷基苯磺酸钠标准溶液（定量限、标准曲线中间浓度及标准曲线上限。），按照已确定的供试液处理方法及液相色谱条件，对该方法的准确度进行考察，重复进样6次，测得平均回收率为94.3%，RSD为1.2%，结果准确，重复性好，可准确定量试样中的十二烷基苯磺酸钠。
8.2 精密度
按照上述检验方法，取线性十二烷基苯磺酸钠标准溶液（15.0μg/mL）重复进样6次，测定峰面积，其相对标准偏差为2.2%。
9 讨论
9.1 同时串联高效液相色谱-荧光检测器和二极管阵列检测器进行样品分析结果表明，荧光检测器具有更高的灵敏度，在0.2～10.0μg/mL浓度范围内，二极管阵列检测器在该浓度范围内无峰值检出。
9.2 SDBS易溶于热醇和水，试验中发现SDBS在热乙醇中溶解速率明显高于在热甲醇和水中，故选择提取液为乙醇：水=1：1。
9.3 以不同比例的甲醇-乙酸铵溶液、乙腈-乙酸铵溶液作为流动相做了实验比较，结果表明，采用甲醇-乙酸铵溶液（75：25）作为流动相对样品分离效果好，峰形对称，保留时间适宜，杂质峰达到基线分离，阴性无干扰，因此，本文采用甲醇-乙酸铵溶液（75：25）作为流动相；因十二烷基笨磺酸钠分子中含有芳香环，对比C18色谱柱和苯基柱，苯基柱分离效果更好、柱效更高。
9.4 跟据面制食品制作的实际过程，自己制作各种面制食品，发现检出线性十二烷基苯磺酸钠的样品并非都为人为添加，实际制作过程中的各种器皿经过洗涤产品洗净后，在未经大量水的反复冲洗情况下，均可能由于洗涤产品的残留而引入线性十二烷基苯磺酸钠。
10、参考文献
[1] 肖晓华.反相液相色谱法分离直链烷基苯磺酸钠同系物和异构体. 色谱，2004， 1： 61-64.
[2] DB62/T 1762-2009. 面制品中十二烷基苯磺酸钠含量测定方法 亚甲蓝分光光度法.
[3] 朱公建等. 面制食品中十二烷基苯磺酸钠的测定.卫生职业教育，2010，07：91-92.
[4] 贾松涛等. SPE-HPLC同时测定馒头中的4种直链烷基苯磺酸钠. 光谱实验室， 2011，28（5）：2411-2415.
[5] CJ/T 51-2004. 城市污水水质检验方法标准
关键词：面制食品；十二烷基苯磺酸钠；高效液相色谱-荧光检测器
中图分类号： R155 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2015）04（a）-0000-00
非法添加洗衣粉之所以能让湿面团发泡，是其主要成分阴离子表面活性剂-十二烷基苯磺酸钠在起作用。表面活性剂有很强的起泡能力，经常被用作发泡剂。而市场上洗衣粉中的阴离子型表面活性剂均以十二烷基苯磺酸钠为主。
我国目前还没有检测食品或食品添加剂中十二烷基苯磺酸钠的国家标准或行业标准，更没有专门检测面制食品中十二烷基苯磺酸钠的标准。甘肃省食品质量监督检验中心检测是参照国家标准《水质阴离子表面活性剂的测定 亚甲蓝分光光度法》和新出台的甘肃省地方标准《面制品中十二烷基苯磺酸钠含量测定方法 亚甲蓝分光光度法》进行的测定。但有文献显示，用该方法测定十二烷基苯磺酸钠，当存在糖精钠、香兰素时会干扰测定结果，产生假阳性。而很多面制食品中多含有食品添加剂糖精钠和香兰素成分。进一步实验发现，用亚甲蓝分光光度法对十二烷基苯磺酸钠和糖精钠进行前处理获得的亚甲蓝衍生液，都显示光吸收阳性，不易区分开来。导致检测结果不准确，容易引起误判。
十二烷基苯磺酸钠具有肝毒性，过量摄入十二烷基苯磺酸钠对人体皮肤、肝脏有损害作用，一旦进入体内，肝脏线粒体会受到影响，血清中钙离子浓度下降，机体出现酸中毒，严重损害人民群众身体健康。
十二烷基苯磺酸钠含有一个芳香环，具有共轭双键，当吸收紫外光后，非定域π电子受到激发，由基态跃迁到第一电子激发态，当受激发电子很快返回基态时发出荧光，故可采用高灵敏度、高选择性的荧光检测器测定，同时，由于HPLC选用具有高效分离能力的色谱柱，使方法的选择性更好。
1、收集典型样品
为确保线性十二烷基笨磺酸钠测定标准的广泛使用性，大量收集了具有代表性的面制食品：馒头、花卷、蛋糕、面包、油条、麻花等种类的样品。
2、试样制备
2.1 试料制备
取试样适量（油炸类、烤制类除去外皮），切成薄片，置电热恒温干燥箱中，80℃烘干，研细备用。
2.2 供试液的制备
视十二烷基笨磺酸钠含量而定，称取试料细粉0.1～1.0g（准确至0.001g），置100mL容量瓶中，加50%乙醇溶液（v/v）适量，再加乙酸锌溶液（1mol/L）1.0mL和亚铁氰化钾溶液（10.6%）1.0mL，超声处理（功率250W，频率33kHz）10min，取出，置恒温水浴振荡器中，于50℃恒温震荡45min，取出，放冷。加50%乙醇溶液（v/v）定容至刻度，混匀。
3 仪器分析条件
通过大量查询文献确定了激发波长和发射波长；经过对流动相、色谱柱、等各种液相色谱条件的试验，得到以下最佳液相色谱条件：
a）色谱柱：Synergi polar-RP（极性端基封尾的醚连接苯基相键合硅胶为填充剂），250×4.6mm，4μm；
b） 流动相：甲醇+乙酸铵溶液（100mmol/L，冰乙酸调节pH至3.4）=75+25（v/v） ；
c） 流速：1.0mL/min；
d） 柱温：室温；
e） 进样量：10μL；
f） gain（增益）：1；
g） 激发波长：EX=230nm； 发射波长：EM=290nm。
5 线性范围
取浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL分别进行HPLC测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算标准曲线线性方程：
6 方法检出限（LOD）
根据GB/T 5009.1-2003（附录A中A.2.1 ）计算：
最低检出限为0.5mg/kg。
方法检出限
7 方法的定量限（LQD）
根据检出限算出方法的定量限（S/N=10），根据实验室内和实验室间验证结果，方法的定量限为：0.2μg/mL。
8 方法的准确度和精密度
8.1 准确度
按照上述方法，选择已知含量的自制试料，分别加入三个水平的线性十二烷基苯磺酸钠标准溶液（定量限、标准曲线中间浓度及标准曲线上限。），按照已确定的供试液处理方法及液相色谱条件，对该方法的准确度进行考察，重复进样6次，测得平均回收率为94.3%，RSD为1.2%，结果准确，重复性好，可准确定量试样中的十二烷基苯磺酸钠。
8.2 精密度
按照上述检验方法，取线性十二烷基苯磺酸钠标准溶液（15.0μg/mL）重复进样6次，测定峰面积，其相对标准偏差为2.2%。
9 讨论
9.1 同时串联高效液相色谱-荧光检测器和二极管阵列检测器进行样品分析结果表明，荧光检测器具有更高的灵敏度，在0.2～10.0μg/mL浓度范围内，二极管阵列检测器在该浓度范围内无峰值检出。
9.2 SDBS易溶于热醇和水，试验中发现SDBS在热乙醇中溶解速率明显高于在热甲醇和水中，故选择提取液为乙醇：水=1：1。
9.3 以不同比例的甲醇-乙酸铵溶液、乙腈-乙酸铵溶液作为流动相做了实验比较，结果表明，采用甲醇-乙酸铵溶液（75：25）作为流动相对样品分离效果好，峰形对称，保留时间适宜，杂质峰达到基线分离，阴性无干扰，因此，本文采用甲醇-乙酸铵溶液（75：25）作为流动相；因十二烷基笨磺酸钠分子中含有芳香环，对比C18色谱柱和苯基柱，苯基柱分离效果更好、柱效更高。
9.4 跟据面制食品制作的实际过程，自己制作各种面制食品，发现检出线性十二烷基苯磺酸钠的样品并非都为人为添加，实际制作过程中的各种器皿经过洗涤产品洗净后，在未经大量水的反复冲洗情况下，均可能由于洗涤产品的残留而引入线性十二烷基苯磺酸钠。
10、参考文献
[1] 肖晓华.反相液相色谱法分离直链烷基苯磺酸钠同系物和异构体. 色谱，2004， 1： 61-64.
[2] DB62/T 1762-2009. 面制品中十二烷基苯磺酸钠含量测定方法 亚甲蓝分光光度法.
[3] 朱公建等. 面制食品中十二烷基苯磺酸钠的测定.卫生职业教育，2010，07：91-92.
[4] 贾松涛等. SPE-HPLC同时测定馒头中的4种直链烷基苯磺酸钠. 光谱实验室， 2011，28（5）：2411-2415.
[5] CJ/T 51-2004. 城市污水水质检验方法标准