【摘 要】
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目的提取人类细胞中的中心体,结合蛋白质谱分析,鉴定中心体蛋白组成。方法采用密度梯度离心方法提取K562细胞内中心体。经蛋白免疫印迹鉴定后,对样品进行蛋白质谱分析检测。
【机 构】
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天津市第一中心医院胸外科; 山东大学齐鲁医院胸外科; 天津师范大学生命科学学院分子细胞系统生物学重点实验室; 山东大学癌症研究中心; 中国医学科学院中国协和医科
【基金项目】
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分子肿瘤学国家重点实验室开放课题(SKL-KF-2013-12);国家自然科学基金(31271485);教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-11-1066)
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目的提取人类细胞中的中心体,结合蛋白质谱分析,鉴定中心体蛋白组成。方法采用密度梯度离心方法提取K562细胞内中心体。经蛋白免疫印迹鉴定后,对样品进行蛋白质谱分析检测。对已检测出的中心体蛋白分子,应用基因本体(GO)进行系统分析。结果成功提取纯化了人类细胞的中心体,检测出中心体相关蛋白分子γ-Tubulin集聚在特定密度梯度离心分离的细胞裂解液组分中,该组分中无线粒体蛋白VDAC1和核糖体蛋白RPL15。经蛋白质谱分析,发现中心体蛋白组分包括多种细胞质物质运输蛋白、细胞骨架蛋白、膜结合蛋白、蛋白激酶等蛋白分子,涵盖多种细胞内生物信号途径。结论成功提取人细胞内中心体,可为提取纯化不同生长时期细胞中的中心体奠定实验技术基础,结合蛋白质谱分析有助于理解中心体的基本结构和各种功能。
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