【摘 要】
：
目的构建重组型半胱天冬酶-3(Caspase-3)基因,观察其对胰腺癌细胞的促凋亡活性,寻求胰腺癌基因治疗新靶点. 方法聚合酶链反应(PCR)克隆野生型Caspase-3大、小亚基(LS、SS);体外重组构建大、小亚基排序颠倒的重组型Caspase-3基因,将其克隆致质粒载体pcDNA3.1(+)中,经脂质体瞬时转染人胰腺癌细胞株,逆转录(RT)-PCR检测其表达;倒置显微镜,DNA电泳,流式细胞
【机 构】
：
四川大学华西医院普外科,610041,710004,西安交通大学附属第二医院普外科,710004,西安交通大学附属第二医院,血液内科,第四军医大学西京医院消化科,四川大学华西医院普外科
论文部分内容阅读
目的构建重组型半胱天冬酶-3(Caspase-3)基因,观察其对胰腺癌细胞的促凋亡活性,寻求胰腺癌基因治疗新靶点. 方法聚合酶链反应(PCR)克隆野生型Caspase-3大、小亚基(LS、SS);体外重组构建大、小亚基排序颠倒的重组型Caspase-3基因,将其克隆致质粒载体pcDNA3.1(+)中,经脂质体瞬时转染人胰腺癌细胞株,逆转录(RT)-PCR检测其表达;倒置显微镜,DNA电泳,流式细胞仪(FCM)检测其凋亡诱导活性. 结果序列分析PCR证实重组型Caspase-3小亚基位于大亚基之前;转染之胰腺癌细胞RT-PCR(反转录可扩增出894 bp大小片段.转染32 h时见细胞减少,碎片增多,结构破坏和无序;DNA电泳见典型的云梯状条带;流式细胞学出现明显凋亡峰.结论重组型Caspase-3可诱导胰腺癌细胞凋亡,可作为胰腺癌基因治疗的目的基因.
其他文献
对1999年冬季江苏省实验动物Beagle犬基地暴发的以拉稀、便血、高死亡率的病犬作流行病学调查、病理和实验室诊断.粪样血凝价高达214以上,并用HI加以验证,初步诊断为犬细小病
目的了解血小板经血细胞分离机单采后膜糖蛋白的变化.方法利用流式细胞仪及CD41a、CD41b、CD42a、CD61、CD62p、PAC-1单克隆抗体对21份机采血小板前后的膜糖蛋白表达率和平均
目的探讨PEEP对外源性肺表面活性物质(PS)功能的影响.方法用血清将PS稀释溶解配制成4.0、24 mg/ml的实验液体.同时将PS溶解于醋酸林格液中配成相同的浓度,作为对照.实验Ⅰ:设定PEEP为0,未成熟胎兔18只随机分为2组(每组9只):A1组,经气道内注入溶解于醋酸林格液的PS 24 mg/ml;B1组,注入溶于血清的PS 24 mg/ml,实验Ⅱ设定PEEP为2.5cm H2O,未成熟
目的探讨高毒有机磷化合物甲胺磷及其替代品乙酰甲胺磷对乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制作用及机制.方法提取人红细胞膜及大鼠脑突触体膜后,体外实验中用Ellman法测定在不同受试物浓度、不同作用时间下剩余AChE活力;整体实验中用Ellman法测定不同脑区AChE活力.结果乙酰甲胺磷和甲胺磷在体外对人红细胞膜及大鼠大脑皮层突触体膜AChE均有不可逆的抑制作用,且有明显的剂量-效应和时间-效应关系,两者对
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因和更昔洛韦(GCV)对膀胱癌细胞的旁观者效应和机制.方法将转染 HSV-tk基因的膀胱癌细胞HTB9与HTB9细胞混合培养,在GCV作用下,观测细胞的存活率.HTB9-tk细胞条件培养基,经不同孔径的滤膜过滤,将滤液及0.22 μm滤膜上的物质重新加入HTB9细胞,观察细胞存活率.结果当 HTB9-tk细胞 50%时,共培养细胞对GCV的敏感性近10
目的观察低功率毫米波局部辐射对大鼠下丘脑及海马组织 中化合物含量的影响,探讨其远位效应机制. 方法分别应用波长 5.6 mm、7.1 mm的毫米波,功率流密度 10 mW/cm2辐射大鼠背部皮肤,每天1 h,连续7 d ,采用1H磁共振波谱技术测定下丘脑及海马组织中Glu、GABA、NAA、Cho、Cr等含量. 结果毫米波辐射后两组海马组织Glu/Cr比值降低,5.6 mm组GABA/Cr 比值增
目的 研究中波紫外线(UVB)照射以及不同钙离子浓度对角质形成细胞表达天疱疮抗原的影响.方法 通过改变培养基中的钙离子浓度以及采用不同剂量UVB照射体外培养的人角质形成细胞,在不同时间段以寻常型天疱疮(PV)或落叶型天疱疮(PF)血清作为一抗进行免疫荧光检测,观察寻常型天疱疮抗原(PVA)和落叶型天疱疮抗原(PFA)的表达情况;提取细胞或皮肤表皮组织蛋白质,用PV和PF血清进行免疫印迹检测.结果
目的制备有活性的同种动脉瓣,为临床心外科提供手术修补材料.方法取健康脑外伤死亡3 h内人类心脏,制备成有活性的同种动脉瓣,加入灭菌液,在37 ℃恒温灭菌24 h,加入冷冻保护液,采用程序降温仪降温从18～22 ℃降到-40 ℃,再将其放入-196 ℃的液氮中保存,待临床应用时快速37 ℃复温化解修剪.结果用该方法制备同种动脉瓣103例,临床应用83例,其中43例随访3～7年,超声心动检查5例发生了