【摘 要】
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采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipase A进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯(p NPP)法进行96孔板高通量筛选。结果表明:第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮
【机 构】
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成都理工大学材料与化学化工学院,成都理工大学矿产资源化学四川省高校重点实验室
【基金项目】
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四川省教育厅科研项目(SZS013)
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采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipase A进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯(p NPP)法进行96孔板高通量筛选。结果表明:第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮易错PCR反应在Mn^2+浓度为0.2 mmol·L^-1时,产生了突变菌株。对该条件下构建的文库中124株突变菌株进行p NPP高通量筛选,突变株4B_2的吸光度值A_(405)为1.395,与未突变株PET32a-lipase A(A_(405)=0.448)差异显著。测序结果表明,突变株4B_2脂肪酶基因
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