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【摘 要】：目的：建立刺山柑果中腺苷含量的测定方法。方法：色谱柱PolarisC18－A 250mm×4．6mm，5μm，AB17，流动相：甲醇：水（15∶85），检测波长：260nm，流速1．0mL／min，柱温：30℃。结果：回归方程为Y＝206997300X＋113157．8（r＝0．9991 n＝5），平均回收率为104．6％，RSD＝4．51％，腺苷的含量为36．61mg／Kg（RSD＝2．89％，n＝5）。结论：本法简捷、准确，适用于刺山柑果中腺苷的含量测定。
【关键词】：刺山柑腺苷反相高效液相法
【中图分类号】R282．71；R284．1【文献标识码】A【文章编号】1007－8517（2008）08－0047－03
Determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L．with RP－HPLC
ZHOU Xiao－ying1CHEN Qiang2 SUN Yun 3
1．College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054；2．Serive center for Teaching and Research， Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054；3．College of TCM，Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054
Abstract ObjectiveTo establish a RP－HPLC method of determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L． Methods ODS column was Polaris C18－A250mm ×4．6mm，5μm，AB17，and the mobile phase consissted of methanol－water（15∶85）．The detecting wavelength was 260nm and The flow rate was 1．0mL／min．The column temperature was 30℃． ResultThe regression equation was Y ＝ 206997300X ＋ 113157．8（r＝0．9991 n＝5）， the average recovery was 104．6％，RSD＝4．51％，the content of adenosine was 36．61mg／Kg（RSD＝2．89％， n＝5）．Conclusion The method was simple，convenient and accurate for determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L．
Key word Fruit of Capparis spinosa Ladenosine RP－HPLC
刺山柑（Capparis spinosa L．）为白花菜科山柑属植物，维吾尔语称刺山柑果为开派，又称野西瓜、老鼠瓜、瓜儿菜、槌果藤、菠里克果和伯格－塔乌孜等，喜生于荒漠戈壁和低山坡石质沙土地处，在新疆、西藏等地以及阿富汗、巴基斯坦、前苏联中亚及北非和地中海沿岸均有分布。刺山柑果性温，具有祛风、散寒、除湿、消肿、止痛的作用，维吾尔医主要用于治疗风寒湿痹，脾胃寒痛，浮肿等疾病1。国内学者姜薇等对刺山柑果的化学成分研究表明其含有腺苷（Ⅴ）等活性成分2。腺苷是一种存在人体内的所有细胞中的内源性核苷，是一种很强的心血管活性物质，它使体循环血管扩张，引起血压下降，有镇静、催眠、抗癫痫作用3。国内外有关刺山柑果中腺苷的研究未见报道，本文首次采用反相高效液相法测定刺山柑果中腺苷的含量，为刺山柑果的药用开发提供一定的质量控制依据。
1 仪器与试药
高效液相仪（Varian 美国）、Prostar 50C工作站，325紫外检测器。RE52CS－2旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂）、BS110S分析天平（北京，赛多利斯）。
腺苷标准品（中国药品生物制品鉴定所879－200001），甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所），刺山柑果实干品（2007年6月采于新疆乌鲁木齐市南山，经新疆医科大学中医学院李永和主任药师鉴定）。
2 方法与结果
2．1 标准品溶液的制备 精密称取腺苷标准品6．0mg，加入色谱纯甲醇溶解，定溶到50ml容量瓶中即得储备液，取50μL加200μL色谱纯甲醇稀释为0．024mg／mL浓度备用。
2．2 供试品溶液的制备 将刺山柑果实捣碎并过40目和60目的药典筛，取中间粉末放在真空干燥箱内（50℃，24h）烘干至恒重，精密称取刺山柑粉末2．5g，用8倍量的甲醇超声三次，每次20min，过滤并合并滤液，浓缩至0．1g／mL备用。
2．3 定性鉴别 用定量点样器吸取15μL样品液，点于10×20cm薄层板上，以氯仿－乙酸乙酯－异丙醇－水（8∶2∶6∶0．5）为展开剂，以腺苷标准品为对照，直立上行展开。在紫外灯254nm下检测后，发现在相同的位置有相同颜色的斑点，刮取与标准品Rf值一致的斑点，置于10mL的带盖试管中，精密加入4mL70％的乙醇，剧烈震荡2min后，以10000r／min离心10min小心吸取上清液，得测试样品液，以同样的方法制的标准品液。测试样品液和标准品液在200～600nm范围内进行紫外扫描的紫外图谱，可知样品紫外吸收图和标准品重合良好，确定最大吸收波长为260nm。
2．4 色谱条件 色谱柱：PolarisC18－A 250mm×4．6mm，5μm，AB17；流动相：甲醇：水15∶85；检测波长为：260mm；流速：1．0mL／min；柱温： 30℃；进样量：5μL。取腺苷对照品溶液和样品溶液，在上述色谱条件下测定。（结果见图1）由图谱可知，样品在腺苷出峰时间区域没有干扰峰出现，故对腺苷的测定无干扰作用。精密吸取腺苷对照品2．5、5、7．5、10、12．5μL，按上述色谱条件，分别进样，测定峰面积，以峰面积积分值y为纵坐标、腺苷量x为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝206997300X＋113157．8，r＝0．9991。线性范围6μg～36μg。
2．5 精密度试验 取腺苷对照品溶液，在同一色谱条件下，重复进样5次，腺苷峰面积积分值的RSD＝1．59％。
2．6 重现性试验 按供试品溶液制备的方法分别制备3份供试样品，平行测定，RSD＝4．2％n＝3。
2．7 稳定性试验 取同一批次供试品溶液5份，在常温下放置12h，每间隔2h测定1次，连续共测定6次，RSD＝3．1％。
2．8 回收率试验 精密量取已知浓度的测试样品溶液3份，分别精密加入一定量腺苷标准品溶液，按供试品溶液的制备方法制备，测定，计算回收率。平均回收率为104．6％，RSD＝4．5％。
2．9 样品测定 吸取腺苷供试品溶液5μL，分别进样，测定，并将其代入标准曲线回归方程分别计算出测试样品中腺苷的浓度，经换算刺山柑果中腺苷的含量为36．61mg／Kg，RSD％＝2．89％。（结果见表1）
3 讨论
本文采用反相高效液相色谱测定刺山柑果中腺苷的含量，操作简便易行，可用于刺山柑果的质量控制。刺山柑果经超声提取，得到的供试品溶液和标准品溶液的反相HPLC图谱完全一致，表明测试样品中含有腺苷，并从文献中获得支持，其它成份无干扰。刺山柑的药理研究表明有降血糖血脂，抗菌，杀虫，保肝，抗炎，抗氧化等作用4。维吾尔医主要用刺山柑治疗痛风、风湿性关节炎等疾病，有较好的疗效5，6。刺山柑有较广泛的药学用途和经济价值，有待于我们进行深入研究。
参考文献
1刘勇民，沙吾提．伊克木．维吾尔药志（下册）M． 新疆新疆科技出版社，1999 868．
2JIANG W姜薇，LIN W H林文翰，GUO S D郭守东． Study on chemical constitutions of Capparis spionosaJ． Journal of Harbin University of CommerceSciences Edition． 哈尔滨商业大学学报 自然科学版， 2005 ，21（6） 684～689in Chinese
3DRURY A N，SZENT A G． The physiological activity of adenine compounds with especial reference to their action upon the mammalian heart J． Physiol． 1929， Nov 25；683：213～37．
4JI Y B季宇彬， GUO S D郭守东，JI C F汲晨锋． Progress of study of Capparis spinosaJ． Journal of Harbin University of CommerceNatural Sciences Edition． 哈尔滨商业大学学报自然科学版， 2006 ，22（1）：5～9in Chinese．
5REN J L任解莉．Treatment of 121 case Periarthritis of shoulder with Capparis spinosaJ．Xin Jiang Journal of Traditional Chinese Medicine． 新疆中医药， 2002，20413in Chinese．
6LUO J罗俊，XIE Y谢阳． Treatment of 15 cases Gout and Rheumatism with fruit of Capparis spinosa LJ．Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy． 中国民族医药杂志， 1999，52：3in Chinese．
（收稿日期：2008．6．30）
【关键词】：刺山柑腺苷反相高效液相法
【中图分类号】R282．71；R284．1【文献标识码】A【文章编号】1007－8517（2008）08－0047－03
Determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L．with RP－HPLC
ZHOU Xiao－ying1CHEN Qiang2 SUN Yun 3
1．College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054；2．Serive center for Teaching and Research， Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054；3．College of TCM，Xinjiang Medical University， XinJiang， Urumqi， 830054
Abstract ObjectiveTo establish a RP－HPLC method of determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L． Methods ODS column was Polaris C18－A250mm ×4．6mm，5μm，AB17，and the mobile phase consissted of methanol－water（15∶85）．The detecting wavelength was 260nm and The flow rate was 1．0mL／min．The column temperature was 30℃． ResultThe regression equation was Y ＝ 206997300X ＋ 113157．8（r＝0．9991 n＝5）， the average recovery was 104．6％，RSD＝4．51％，the content of adenosine was 36．61mg／Kg（RSD＝2．89％， n＝5）．Conclusion The method was simple，convenient and accurate for determination of adenosine in fruit of Capparis spinosa L．
Key word Fruit of Capparis spinosa Ladenosine RP－HPLC
刺山柑（Capparis spinosa L．）为白花菜科山柑属植物，维吾尔语称刺山柑果为开派，又称野西瓜、老鼠瓜、瓜儿菜、槌果藤、菠里克果和伯格－塔乌孜等，喜生于荒漠戈壁和低山坡石质沙土地处，在新疆、西藏等地以及阿富汗、巴基斯坦、前苏联中亚及北非和地中海沿岸均有分布。刺山柑果性温，具有祛风、散寒、除湿、消肿、止痛的作用，维吾尔医主要用于治疗风寒湿痹，脾胃寒痛，浮肿等疾病1。国内学者姜薇等对刺山柑果的化学成分研究表明其含有腺苷（Ⅴ）等活性成分2。腺苷是一种存在人体内的所有细胞中的内源性核苷，是一种很强的心血管活性物质，它使体循环血管扩张，引起血压下降，有镇静、催眠、抗癫痫作用3。国内外有关刺山柑果中腺苷的研究未见报道，本文首次采用反相高效液相法测定刺山柑果中腺苷的含量，为刺山柑果的药用开发提供一定的质量控制依据。
1 仪器与试药
高效液相仪（Varian 美国）、Prostar 50C工作站，325紫外检测器。RE52CS－2旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂）、BS110S分析天平（北京，赛多利斯）。
腺苷标准品（中国药品生物制品鉴定所879－200001），甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所），刺山柑果实干品（2007年6月采于新疆乌鲁木齐市南山，经新疆医科大学中医学院李永和主任药师鉴定）。
2 方法与结果
2．1 标准品溶液的制备 精密称取腺苷标准品6．0mg，加入色谱纯甲醇溶解，定溶到50ml容量瓶中即得储备液，取50μL加200μL色谱纯甲醇稀释为0．024mg／mL浓度备用。
2．2 供试品溶液的制备 将刺山柑果实捣碎并过40目和60目的药典筛，取中间粉末放在真空干燥箱内（50℃，24h）烘干至恒重，精密称取刺山柑粉末2．5g，用8倍量的甲醇超声三次，每次20min，过滤并合并滤液，浓缩至0．1g／mL备用。
2．3 定性鉴别 用定量点样器吸取15μL样品液，点于10×20cm薄层板上，以氯仿－乙酸乙酯－异丙醇－水（8∶2∶6∶0．5）为展开剂，以腺苷标准品为对照，直立上行展开。在紫外灯254nm下检测后，发现在相同的位置有相同颜色的斑点，刮取与标准品Rf值一致的斑点，置于10mL的带盖试管中，精密加入4mL70％的乙醇，剧烈震荡2min后，以10000r／min离心10min小心吸取上清液，得测试样品液，以同样的方法制的标准品液。测试样品液和标准品液在200～600nm范围内进行紫外扫描的紫外图谱，可知样品紫外吸收图和标准品重合良好，确定最大吸收波长为260nm。
2．4 色谱条件 色谱柱：PolarisC18－A 250mm×4．6mm，5μm，AB17；流动相：甲醇：水15∶85；检测波长为：260mm；流速：1．0mL／min；柱温： 30℃；进样量：5μL。取腺苷对照品溶液和样品溶液，在上述色谱条件下测定。（结果见图1）由图谱可知，样品在腺苷出峰时间区域没有干扰峰出现，故对腺苷的测定无干扰作用。精密吸取腺苷对照品2．5、5、7．5、10、12．5μL，按上述色谱条件，分别进样，测定峰面积，以峰面积积分值y为纵坐标、腺苷量x为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝206997300X＋113157．8，r＝0．9991。线性范围6μg～36μg。
2．5 精密度试验 取腺苷对照品溶液，在同一色谱条件下，重复进样5次，腺苷峰面积积分值的RSD＝1．59％。
2．6 重现性试验 按供试品溶液制备的方法分别制备3份供试样品，平行测定，RSD＝4．2％n＝3。
2．7 稳定性试验 取同一批次供试品溶液5份，在常温下放置12h，每间隔2h测定1次，连续共测定6次，RSD＝3．1％。
2．8 回收率试验 精密量取已知浓度的测试样品溶液3份，分别精密加入一定量腺苷标准品溶液，按供试品溶液的制备方法制备，测定，计算回收率。平均回收率为104．6％，RSD＝4．5％。
2．9 样品测定 吸取腺苷供试品溶液5μL，分别进样，测定，并将其代入标准曲线回归方程分别计算出测试样品中腺苷的浓度，经换算刺山柑果中腺苷的含量为36．61mg／Kg，RSD％＝2．89％。（结果见表1）
3 讨论
本文采用反相高效液相色谱测定刺山柑果中腺苷的含量，操作简便易行，可用于刺山柑果的质量控制。刺山柑果经超声提取，得到的供试品溶液和标准品溶液的反相HPLC图谱完全一致，表明测试样品中含有腺苷，并从文献中获得支持，其它成份无干扰。刺山柑的药理研究表明有降血糖血脂，抗菌，杀虫，保肝，抗炎，抗氧化等作用4。维吾尔医主要用刺山柑治疗痛风、风湿性关节炎等疾病，有较好的疗效5，6。刺山柑有较广泛的药学用途和经济价值，有待于我们进行深入研究。
参考文献
1刘勇民，沙吾提．伊克木．维吾尔药志（下册）M． 新疆新疆科技出版社，1999 868．
2JIANG W姜薇，LIN W H林文翰，GUO S D郭守东． Study on chemical constitutions of Capparis spionosaJ． Journal of Harbin University of CommerceSciences Edition． 哈尔滨商业大学学报 自然科学版， 2005 ，21（6） 684～689in Chinese
3DRURY A N，SZENT A G． The physiological activity of adenine compounds with especial reference to their action upon the mammalian heart J． Physiol． 1929， Nov 25；683：213～37．
4JI Y B季宇彬， GUO S D郭守东，JI C F汲晨锋． Progress of study of Capparis spinosaJ． Journal of Harbin University of CommerceNatural Sciences Edition． 哈尔滨商业大学学报自然科学版， 2006 ，22（1）：5～9in Chinese．
5REN J L任解莉．Treatment of 121 case Periarthritis of shoulder with Capparis spinosaJ．Xin Jiang Journal of Traditional Chinese Medicine． 新疆中医药， 2002，20413in Chinese．
6LUO J罗俊，XIE Y谢阳． Treatment of 15 cases Gout and Rheumatism with fruit of Capparis spinosa LJ．Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy． 中国民族医药杂志， 1999，52：3in Chinese．
（收稿日期：2008．6．30）