【摘 要】
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目的 构建2种抑制HIF—1α的siRNA表达载体。方法根据GenBank中HIF—1α序列信息并结合2种pSUPER载体的共同的酶切位点结构，化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向HIF-1α基因的寡核苷酸链，各60个碱基、退火、克隆到经BglⅠ、HindⅢ双酶切的2种pSUPER载体上，获得的2种重组RNAi质粒转化感受态大肠杆菌，挑选阳性克隆，抽取重组质粒，EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、
【机 构】
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福建医科大学附属厦门第一医院泌尿外科,福建医科大学附属厦门第一医院泌尿外科,福建医科大学附属厦门第一医院泌尿外科
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目的 构建2种抑制HIF—1α的siRNA表达载体。方法根据GenBank中HIF—1α序列信息并结合2种pSUPER载体的共同的酶切位点结构，化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向HIF-1α基因的寡核苷酸链，各60个碱基、退火、克隆到经BglⅠ、HindⅢ双酶切的2种pSUPER载体上，获得的2种重组RNAi质粒转化感受态大肠杆菌，挑选阳性克隆，抽取重组质粒，EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定，培养前列腺癌PC-3细胞通过Western blot检测2种重组RNAi载体干扰效果。结果将重组构建的2种pSUPER质粒经双酶切电泳分析及插入基因片段进行序列分析，目的基因片段成功插入到设计位点，并且序列完全一致。2种重组质粒可显著降低前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达。结论2种重组RNAi载体的成功构建，为进一步研究HIF—1α在前列腺癌发病机理及增殖、转移中的功能奠定了基础，同时可以用于其在其他肿瘤的功能研究。
其他文献
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尿路结石微创外科治疗过去10年突飞猛进.而药物排石疗法(MET)在尿路结石治疗中仍占重要地位.排石药物主要包括:α-受体阻滞剂、钙离子通道拮抗剂、前列腺素生成酶抑制剂、性激素、糖皮质激素.现对药物排石疗法研究新进展作一综述。
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