【摘 要】
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目的:探讨质粒编码的分泌蛋白Pgp3在沙眼衣原体(Ct)感染宿主过程中的作用及机制,为防治Ct引起的泌尿生殖道感染提供实验依据.方法:构建pGEX-6p/Pgp3原核表达重组质粒并转化XL
【机 构】
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河北北方学院神经药理学省重点实验室,张家口 075000;河北北方学院附属第一医院,张家口075000
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目的:探讨质粒编码的分泌蛋白Pgp3在沙眼衣原体(Ct)感染宿主过程中的作用及机制,为防治Ct引起的泌尿生殖道感染提供实验依据.方法:构建pGEX-6p/Pgp3原核表达重组质粒并转化XL1-Blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-Pgp3融合蛋白,融合蛋白经亲和层析纯化及GST标签切割后制备Pgp3蛋白.将抗菌肽LL37和Pgp3蛋白共同孵育Ct后感染HeLa细胞,间接免疫荧光技术检测不同处理组Ct包涵体数量.GST pull-down法研究Pgp3与LL37的作用方式及Pgp3的活性片段.结果:LL37与Ct内原体(EB)孵育后感染HeLa细胞,感染率从50％降至10％,不同浓度Pgp3与LL37预先孵育后处理Ct EB再感染HeLa细胞,感染率较LL37组显著升高(P<0.05),且具有剂量依赖性.GST pull-down实验结果显示,LL37可与Pgp3结合,且结合部位位于Pgp3中间段(67～132 aa).结论:Pgp3在Ct感染宿主过程中通过与人类抗菌肽LL37结合,抑制LL37对Ct的杀伤作用,导致Ct感染.
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