【摘 要】
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利用PCR技术扩增出tp和crtB基因,胶回收后分别连接到pMD18-T栽体测序.tb和crtB基因经酶切回收后通过pBlue-script KS质粒连在一起构建成pSK-tp-crtB,通过BamH Ⅰ和Sac Ⅰ酶切
【机 构】
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华中科技大学生命科学与技术学院,分子生物物理教育部重点实验室,武汉,430074
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利用PCR技术扩增出tp和crtB基因,胶回收后分别连接到pMD18-T栽体测序.tb和crtB基因经酶切回收后通过pBlue-script KS质粒连在一起构建成pSK-tp-crtB,通过BamH Ⅰ和Sac Ⅰ酶切,从pSK-tp-crtB载体上切下目的基因片段tp-crtB,替换pBI121-napA载体中的GFP基因,构建了tp-crtB基因在植物种子中特异性表达的载体pBI121-tp-crtB.转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α.测序鉴定后将阳性质粒转化农杆菌感受态细胞EHA105,经菌液和质粒PCR分析,获得了真核表达载体pBI121-tp-crtB,为crtB基因功能的进一步研究奠定基础.
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