【摘 要】
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目的:用色谱法纯化制备携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒.方法:采用5 L生物反应器悬浮培养HEK-293N3S细胞进行病毒的扩增,冻融法裂解细胞,通过超滤、Source 15Q离子交换层析
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的:用色谱法纯化制备携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒.方法:采用5 L生物反应器悬浮培养HEK-293N3S细胞进行病毒的扩增,冻融法裂解细胞,通过超滤、Source 15Q离子交换层析和Sepharose 4 Fast Flow凝胶过滤层析进行分离纯化,采用分光光度法和高效液相色谱法分析重组腺病毒产品的纯度,采用组织培养半数感染剂量方法测定病毒的感染滴度.结果:通过两步色谱层析得到产品,经分光光度法分析,其D260nm/D280nm比值为1.21,高效液相色谱法分析其纯度达96.5%,产品滴度为1.0×1011/mL,病毒颗粒数为1.76×1012/mL,比活性为5.68%.结论:确定了稳定可行的重组腺病毒色谱分离工艺,得到的产品在纯度、滴度和比活性等方面均符合国家食品药品监督管理局的标准.
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