【摘 要】
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目的:探究miR-35对胃癌细胞MNK-45凋亡的作用及机制.方法:利用q-PCR技术检测胃癌细胞系MNK-45中miR-35的含量;利用细胞转染方法分别将miR-35的阴性对照序列(对照组)、miR-35的模拟序列(模拟物组)或miR-35的互补配对序列(抑制剂组)转染入胃癌细胞MNK-45后,利用荧光显像技术和q-PCR技术检测转染效果;利用流式细胞仪检测转染后各组细胞系凋亡水平,再进一步利用形态学手段评估细胞凋亡情况;利用Western blot技术检测凋亡相关蛋白相对含量;利用荧光素酶报告基因技术
【机 构】
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榆林市第一医院普外科,陕西 榆林 719000;空军军医大学航空航天医学院,陕西 西安 710032
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目的:探究miR-35对胃癌细胞MNK-45凋亡的作用及机制.方法:利用q-PCR技术检测胃癌细胞系MNK-45中miR-35的含量;利用细胞转染方法分别将miR-35的阴性对照序列(对照组)、miR-35的模拟序列(模拟物组)或miR-35的互补配对序列(抑制剂组)转染入胃癌细胞MNK-45后,利用荧光显像技术和q-PCR技术检测转染效果;利用流式细胞仪检测转染后各组细胞系凋亡水平,再进一步利用形态学手段评估细胞凋亡情况;利用Western blot技术检测凋亡相关蛋白相对含量;利用荧光素酶报告基因技术检测miR-35的下游靶基因.结果:多种胃癌细胞系中miR-35的表达较正常胃黏膜细胞低(P<0.05);与对照组相比,转染miR-35模拟序列后MNK-45内miR-35含量增加(P<0.05),转染miR-35的互补配对序列后MNK-45内miR-35含量降低(P<0.05);与对照组相比,转染miR-35模拟序列后MNK-45细胞凋亡增加(P<0.05),转染miR-35的互补配对序列后MNK-45细胞凋亡减少(P<0.05);与对照组相比,转染miR-35模拟序列后MNK-45内Caspase 3和Bax等促凋亡蛋白表达增加(均P<0.05),而Bcl-2表达减少(P<0.05);转染miR-35的互补配对序列后MNK-45细胞内Caspase 3和Bax等促凋亡蛋白表达减少,而Bcl-2表达增加(均P<0.05);与对照组相比,miR-35模拟序列抑制Ras同源基因家族成员A(RhoA)3\'UTR质粒的荧光素酶活性(P<0.05);与对照组相比,miR-35模拟序列抑制RhoA蛋白表达(P<0.05),而miR-35的互补配对序列促进RhoA蛋白表达(P<0.05).结论:胃癌细胞系内低表达miR-35,miR-35可通过靶向RhoA促进胃癌细胞MNK-45的凋亡.
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