【摘 要】
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目的:建立一种干扰素诱导跨膜蛋白2(IFITM2)基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,以期为IFITM2基因的动态监测提供有效的检测技术.方法:根据GenBank中公布的IFITM2基因
【机 构】
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西北民族大学 生物医学研究中心 生物工程与技术国家民委重点实验室,甘肃 兰州 730030西北民族大学 生命科学与工程学院,甘肃 兰州 730030;西北民族大学 生物医学研究中心 生物工程与技术国家
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目的:建立一种干扰素诱导跨膜蛋白2(IFITM2)基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,以期为IFITM2基因的动态监测提供有效的检测技术.方法:根据GenBank中公布的IFITM2基因序列设计特异性引物,以质粒pMD18-T-IFITM2为模板进行条件优化,绘制标准曲线,建立IFITM2基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对建立的方法进行条件优化与评价,用建立的方法对脑心肌炎病毒感染后细胞中IFITM2基因转录水平进行检测.结果:建立的20μL检测体系中IFITM2基因最佳引物浓度为10μM,最佳退火温度为59℃;标准质粒在2.62×105～2.62×1010 copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好线性关系,线性方程y=-3.495 logx+43.12,R2=0.998,且灵敏性、特异性和重复性均较高.应用建立的方法对EMCV感染细胞中IFITM2基因转录水平进行检测,结果显示,在感染早期IFITM2转录水平不变,感染后期转录水平逐渐升高.EMCV感染引起宿主IFITM2基因转录水平的变化,可能与EM-CV逃逸宿主相关免疫应答有关.结论:成功建立了一种快速、准确检测IFITM2基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.该方法的建立,为进一步研究IFITM2在EMCV感染过程中的作用奠定了基础.
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