【摘 要】
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目的：对基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物（antibody-drug conjugate，ADC）抗CD79b单抗-vc-MMAE进行一级结构表征。方法：本实验采用超高效液相色谱-串联质谱（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry， UPLC-MS）对抗CD79b单抗-vc-MMAE的完整分子量、轻重链亚基分
【机 构】
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中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室
【基金项目】
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国家药典标准提高课题：人用抗体偶联药物制品总论（2022S04）；
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目的：对基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物（antibody-drug conjugate，ADC）抗CD79b单抗-vc-MMAE进行一级结构表征。方法：本实验采用超高效液相色谱-串联质谱（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry， UPLC-MS）对抗CD79b单抗-vc-MMAE的完整分子量、轻重链亚基分子量以及药物抗体偶联比（drug-to-antibody ratio，DAR）进行测定；采用UPLC-MS/MS对抗CD79b单抗-vc-MMAE的序列覆盖度、偶联位点及位点占有率和糖基化位点进行分析，对抗CD79b单抗进行二硫键定位。结果：抗CD79b单抗-vc-MMAE的完整分子量包括：ADC药物的未加药形式的分子量为147.893 kDa、修饰2个小分子药物的分子量为150.527 kDa、修饰4个小分子药物的分子量为153.161 kDa以及修饰6个小分子药物的分子量为155.796 kDa；抗CD79b单抗-vc-MMAE的轻重链亚基分子量包括：轻链的分子量为23.726 kDa、轻链修饰1个小分子药物的分子量为25.043 kDa，重链的分子量为48.778 kDa、重链修饰1个小分子药物的分子量为50.095 kDa、重链修饰2个小分子药物的分子量为51.412 kDa、重链修饰3个小分子药物的分子量为52.728 kDa；抗CD79b单抗-vc-MMAE的DAR为3.60；抗CD79b单抗-vc-MMAE的序列覆盖度为100%；抗CD79b单抗-vc-MMAE的药物偶联位点及位点占有率：轻链C218和重链C220、C226和C229的位点占有率分别为80.46%、80.39%、21.85%以及16.98%。抗CD79b单抗-vc-MMAE的糖基化位点为重链N297；抗CD79b单抗的16对二硫键全部检出。结论：表征了抗CD79b单抗-vc-MMAE的一级结构，为该类ADC药物一级结构的研究提供参考依据。
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