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关键词：地黄补益酒 川续断皂苷Ⅵ 含量测定 HPLC
地黄补益酒为本厂自主开发研制的中药新药，由地黄、山茱萸、女贞子、续断等十味中药经现代工艺制备而成，具有养阴助阳，益肾填精的作用。为了更好地控制该制剂的质量，保证药品临床疗效，本实验采用高效液相色谱法对本品中所含的川续断皂苷Ⅵ进行了含量测定，试验结果表明，此方法具有良好的专属性，重现性好，操作简便，可用于该制剂的质量控制。
1仪器与试药
仪器：美国Agilent 1100高效液相色谱仪
Agilent 1100series G1314A可变波长检测器
G2170AA色谱工作站 （安捷伦科技有限公司）
G1311A四元泵
川续断皂苷Ⅵ对照品：由中国药品生物制品检定所提供 批号111685-200401
乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯
地黄补益酒（自制）
2 方法与结果
2．1色谱及检测条件：
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（奥泰公司 C18250mm×4.6mm×5μm）；检测波长：195nm；流动相：乙腈-水（30：70）；流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量20μl
2.2供试品溶液的制备 精密量取本品100ml，置水浴蒸至无醇味，加水30ml使溶解，用水饱合的正丁醇轻轻振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，置水浴蒸干，残渣加流动相适量使溶解，溶液转至50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
2.3对照品溶液的制备 精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，加甲醇制成每1ml含1.5mg的溶液。精密量取1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 样品测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.5专属性试验
按处方配比投入缺续断的其它药材和辅料，按工艺制成空白制剂；按供试品溶液配制的方法提取，并按上述色谱条件测试。结果在川续断皂苷Ⅵ对照品出峰位置未见其它杂质的干扰峰，说明按本文的实验条件测定，缺续断的阴性液无干扰。
2.6线性关系考察
精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含川续断皂苷Ⅵ0.5mg）。精密量取上述溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置于10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，以川续断皂苷Ⅵ进样浓度为横坐标，相应的峰面积（mAU）为纵坐标绘制标准曲线。其回归方程为：y=7580.1997x-4.8538（r=0.9989），结果表明，对照品溶液浓度在0.05mg/ml～0.25mg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
2.7精密度试验
取上述0.15mg/ml浓度的川续断皂苷Ⅵ对照品溶液20μl注入液相色谱仪，重复进样6次，测定川续断皂苷Ⅵ峰面积，结果RSD为0.46%
2.8稳定性试验
取供试品溶液，注入液相色谱仪，每隔一定时间测定1次峰面积积分值，共测定5次。结果川续断皂苷Ⅵ峰面积RSD为0.99%，表明供试品溶液在8h内基本稳定。
2.9重复性试验
精密称取同一批号的样品6份，按照供试品溶液制备方法制得，并按以上色谱条件测试，以川续断皂苷Ⅵ计，结果平均含量为0.0715mg/ml，RSD为0.62%
3.0加样回收率试验
取本品（批号：0610504含量0.07149mg/ml）六份各50ml，分别置水浴蒸至无醇味，再分别加水30ml使溶解，分别加入川续断皂苷Ⅵ对照品溶液1ml（取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为3.302mg/ml对照品溶液，含川续断皂苷Ⅵ对照品3.302mg），用水饱合的正丁醇轻轻振摇提取4次，每次30ml，以下按供试品溶液制备法制备，并按以上色谱条件测定。平均回收率为99.94%，RSD为1.24％，结果见下表。
3讨论
3.1由于酒剂提取物比较多，含糖量大，样品成分不易分离，很多酒剂品种只有薄层鉴别方法而无含测方法。为此，本文可为其他含有皂苷类酒剂制定质量标准提供参考。
3.2以中国药典2005年版一部续断[1]含测方法为基础，经筛选样品不同的处理方法，确定本文样品处理方法及洗脱条件。
参考文献：
［1］ 中国药典2005年版一部[S].2005：231
地黄补益酒为本厂自主开发研制的中药新药，由地黄、山茱萸、女贞子、续断等十味中药经现代工艺制备而成，具有养阴助阳，益肾填精的作用。为了更好地控制该制剂的质量，保证药品临床疗效，本实验采用高效液相色谱法对本品中所含的川续断皂苷Ⅵ进行了含量测定，试验结果表明，此方法具有良好的专属性，重现性好，操作简便，可用于该制剂的质量控制。
1仪器与试药
仪器：美国Agilent 1100高效液相色谱仪
Agilent 1100series G1314A可变波长检测器
G2170AA色谱工作站 （安捷伦科技有限公司）
G1311A四元泵
川续断皂苷Ⅵ对照品：由中国药品生物制品检定所提供 批号111685-200401
乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯
地黄补益酒（自制）
2 方法与结果
2．1色谱及检测条件：
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（奥泰公司 C18250mm×4.6mm×5μm）；检测波长：195nm；流动相：乙腈-水（30：70）；流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量20μl
2.2供试品溶液的制备 精密量取本品100ml，置水浴蒸至无醇味，加水30ml使溶解，用水饱合的正丁醇轻轻振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，置水浴蒸干，残渣加流动相适量使溶解，溶液转至50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
2.3对照品溶液的制备 精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，加甲醇制成每1ml含1.5mg的溶液。精密量取1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 样品测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.5专属性试验
按处方配比投入缺续断的其它药材和辅料，按工艺制成空白制剂；按供试品溶液配制的方法提取，并按上述色谱条件测试。结果在川续断皂苷Ⅵ对照品出峰位置未见其它杂质的干扰峰，说明按本文的实验条件测定，缺续断的阴性液无干扰。
2.6线性关系考察
精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品12.5mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含川续断皂苷Ⅵ0.5mg）。精密量取上述溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置于10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，以川续断皂苷Ⅵ进样浓度为横坐标，相应的峰面积（mAU）为纵坐标绘制标准曲线。其回归方程为：y=7580.1997x-4.8538（r=0.9989），结果表明，对照品溶液浓度在0.05mg/ml～0.25mg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
2.7精密度试验
取上述0.15mg/ml浓度的川续断皂苷Ⅵ对照品溶液20μl注入液相色谱仪，重复进样6次，测定川续断皂苷Ⅵ峰面积，结果RSD为0.46%
2.8稳定性试验
取供试品溶液，注入液相色谱仪，每隔一定时间测定1次峰面积积分值，共测定5次。结果川续断皂苷Ⅵ峰面积RSD为0.99%，表明供试品溶液在8h内基本稳定。
2.9重复性试验
精密称取同一批号的样品6份，按照供试品溶液制备方法制得，并按以上色谱条件测试，以川续断皂苷Ⅵ计，结果平均含量为0.0715mg/ml，RSD为0.62%
3.0加样回收率试验
取本品（批号：0610504含量0.07149mg/ml）六份各50ml，分别置水浴蒸至无醇味，再分别加水30ml使溶解，分别加入川续断皂苷Ⅵ对照品溶液1ml（取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为3.302mg/ml对照品溶液，含川续断皂苷Ⅵ对照品3.302mg），用水饱合的正丁醇轻轻振摇提取4次，每次30ml，以下按供试品溶液制备法制备，并按以上色谱条件测定。平均回收率为99.94%，RSD为1.24％，结果见下表。
3讨论
3.1由于酒剂提取物比较多，含糖量大，样品成分不易分离，很多酒剂品种只有薄层鉴别方法而无含测方法。为此，本文可为其他含有皂苷类酒剂制定质量标准提供参考。
3.2以中国药典2005年版一部续断[1]含测方法为基础，经筛选样品不同的处理方法，确定本文样品处理方法及洗脱条件。
参考文献：
［1］ 中国药典2005年版一部[S].2005：231