探讨早发重度子痫前期、HELLP综合征及抗磷脂综合征(APS)对胎盘滋养细胞线粒体长链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)基因甲基化程度的影响及其与基因mRNA表达的相关性。
方法采集2013年1月至2015年3月在北京大学第三医院产前检查及住院治疗的病理妊娠孕妇的血清，其中早发重度子痫前期14例(子痫前期组)、HELLP综合征12例(HELLP组)及APS 14例(APS组)为病理妊娠组，以正常妊娠的14例孕妇的血清为对照(对照组)；原代绒毛滋养细胞来自于2014年3月至8月在北京大学第三医院自愿要求人工流产、胚胎正常、无妊娠合并症和并发症妇女40例的绒毛组织。在体外培养原代绒毛滋养细胞和永久性滋养细胞系HTR-8/Svneo细胞，分别加入相同浓度(10%)的4组孕妇的血清，孵育24 h后收集各组滋养细胞。(1)采用在线生物信息学预测软件(MethPrimer软件)预测滋养细胞中LCHAD基因启动子区二核苷酸胞嘧啶(CpG)岛甲基化位点的数量及位置；(2)通过MassARRAY甲基化DNA定量分析平台检测4组滋养细胞中LCHAD基因启动子区各位点的甲基化程度；(3)采用实时荧光定量逆转录(RT)-PCR技术检测4组滋养细胞中LCHAD mRNA的表达水平；(4)采用Pearson相关系数对4组滋养细胞中LCHAD基因启动子区各位点的甲基化程度与LCHAD mRNA的表达水平进行相关性分析。
结果因原代滋养细胞和HTR-8/Svneo细胞两种细胞的实验结果完全一致，故将两种细胞合并用"滋养细胞"表述。(1)滋养细胞中LCHAD基因启动子区目标CpG岛(长度558 bp)中，含有17个胞嘧啶鸟嘌呤(CG)位点，获得其中11个(11/17)位点的甲基化程度，其位置分别为：-984、-960、-899、-853、-811、-796、-774、-727、-615、-595、-579位点，其中-899、-796及-774位点为复合位点(含有2个及以上CG序列)，另外8个为单独位点(含有1个CG序列)。(2)病理妊娠组滋养细胞中甲基化程度较高的位点为-899、-853、-615及-595位点，子痫前期组、HELLP组-899、-853及-615位点的甲基化程度均明显高于对照组(P<0.01)，子痫前期组-853位点的甲基化程度明显高于HELLP组(P<0.05)；HELLP组、APS组及对照组-595位点均呈无甲基化状态，分别与子痫前期组比较，差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)子痫前期组滋养细胞中LCHAD mRNA的表达水平为0.048±0.005, HELLP组为0.045±0.006, APS组为0.044±0.004，均显著低于对照组的0.076±0.009(P<0.01)。(4)子痫前期组滋养细胞中LCHAD基因启动子区-899、-853、-727、-615及-579位点的甲基化程度与基因mRNA的表达水平均呈明显负相关(P<0.05)；HELLP组滋养细胞中LCHAD基因启动子区-899、-853、-615位点的甲基化程度与基因mRNA的表达水平均呈明显负相关(P<0.05)；而APS和对照组滋养细胞中两者均无显著相关性(P>0.05)。
结论早发重度子痫前期、HELLP综合征、APS对滋养细胞中LCHAD基因启动子区的甲基化修饰存在差异，早发重度子痫前期、HELLP综合征滋养细胞中LCHAD基因启动子区甲基化修饰程度明显升高，并与LCHAD mRNA表达水平呈明显负相关性，进一步揭示了长链脂肪酸氧化改变在不同病理妊娠中的分子学基础。