【摘 要】
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目的 探讨磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶(PIK3CA)基因沉默对宫颈癌生物学特性的影响及其机制.方法 选取188例宫颈癌病人癌组织及癌旁组织标本,采用SP免疫组化法检测PIK3CA蛋白表达阳性率.取宫颈癌细胞株并细胞转染分为6组:空白(Blank)组、阴性对照(NC)组、上调PIK3CA表达(HA-PIK3CA)组、沉默PIK3CA表达(PIK3CA-siRNA)组、信号通路拮抗剂(LY294002)组、信号通路拮抗剂+沉默PIK3CA表达(LY294002+PIK3CA-siRNA)组.采用
【机 构】
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濮阳市油田总医院妇产科,河南 濮阳 457001;濮阳市油田总医院病理科;许昌学院
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目的 探讨磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶(PIK3CA)基因沉默对宫颈癌生物学特性的影响及其机制.方法 选取188例宫颈癌病人癌组织及癌旁组织标本,采用SP免疫组化法检测PIK3CA蛋白表达阳性率.取宫颈癌细胞株并细胞转染分为6组:空白(Blank)组、阴性对照(NC)组、上调PIK3CA表达(HA-PIK3CA)组、沉默PIK3CA表达(PIK3CA-siRNA)组、信号通路拮抗剂(LY294002)组、信号通路拮抗剂+沉默PIK3CA表达(LY294002+PIK3CA-siRNA)组.采用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法分别检测转染后各组细胞中PIK3CA、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、PKB蛋白激酶(又称AKT)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的mRNA和蛋白表达水平.应用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测各组细胞增殖及凋亡.结果 与癌旁组织相比,癌组织PIK3CA蛋白阳性表达率显著升高,且与宫颈癌病人TNM分期、淋巴结转移和组织学分级均有关(χ2=6.766～31.171,P均<0.05).与Blank组和NC组相比,PIK3CA-siRNA组、LY294002组和LY294002+PIK3CA-siRNA组的PIK3CA、PI3K、AKT、N-cadherin和Vi-mentin的mRNA和蛋白表达量均明显降低,E-cadherin表达明显增加,细胞增殖活性降低,细胞凋亡增加,差异均有统计学意义(FmRNA=58.5～185.1,F蛋白=48.1～130.5,F增殖=28.0～98.8,F凋亡=213.9,P均<0.05);且LY294002+PIK3CA-siRNA组趋势更为显著(P均<0.05);而上述指标趋势在HA-PIK3CA组被逆转(P均<0.05).结论 沉默PIK3CA基因可能通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活,进而抑制宫颈癌上皮间质转化,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡.
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